Analiza kolorymetryczna

Analiza kolorymetryczna to metoda oznaczania stężenia pierwiastka lub związku chemicznego w roztworze za pomocą odczynnika barwiącego . Ma zastosowanie zarówno do związków organicznych , jak i nieorganicznych i może być stosowany z etapem enzymatycznym lub bez niego . Metoda jest szeroko stosowana w laboratoriach medycznych oraz do celów przemysłowych np. analiza próbek wody w związku z uzdatnianiem wody przemysłowej .

Sprzęt

Wymagany sprzęt to kolorymetr , kilka kuwet i odpowiedni odczynnik barwny. Proces można zautomatyzować, np. za pomocą AutoAnalyzera lub analizy wtrysku przepływowego . Niedawno analizy kolorymetryczne opracowane dla kolorymetrów zostały przystosowane do użytku z czytnikami płytek, aby przyspieszyć analizę i zmniejszyć strumień odpadów.

Metody nieenzymatyczne

Przykłady

Wapń

Wapń + kompleks o-krezolftaleiny → kolorowy kompleks

Miedź

miedzi + batokuproiny → kompleks barwny

Kreatynina

Kreatynina + pikrynian → kolorowy kompleks

Żelazo

Żelazo + disulfonian bathofenantroliny → kompleks barwny

Fosforan (nieorganiczny)

Fosfor + molibdenian amonu + kwas askorbinowy → niebieski kompleks

Metody enzymatyczne

W analizie enzymatycznej (która jest szeroko stosowana w laboratoriach medycznych ) reakcja barwna jest poprzedzona reakcją katalizowaną przez enzym . Ponieważ enzym jest specyficzny dla określonego substratu , można uzyskać dokładniejsze wyniki. Analizę enzymatyczną przeprowadza się zawsze w roztworze buforowym w określonej temperaturze (zwykle 37°C), aby zapewnić optymalne warunki działania enzymów. Oto przykłady.

Przykłady

Cholesterol (metoda CHOD-PAP)

1. Cholesterol + tlen --(enzym oksydaza cholesterolowa ) --> cholestenon + nadtlenek wodoru
2. Nadtlenek wodoru + 4- aminofenazon + fenol --( peroksydaza enzymatyczna )--> kompleks barwny + woda

Glukoza (metoda GOD-Perid)

1. glukoza + tlen + woda --(enzym oksydaza glukozowa ) --> glukonian + nadtlenek wodoru
2. Nadtlenek wodoru + ABTS --( peroksydaza enzymatyczna ) --> kompleks barwny

W tym przypadku oba etapy reakcji są katalizowane przez enzymy.

Trójglicerydy (metoda GPO-PAP)

1. Trójglicerydy + woda --(enzym esteraza )--> gliceryna + kwas karboksylowy
2. Glicerol + ATP --(enzym kinaza glicerolowa )--> glicerol-3-fosforan + ADP
3. 3-fosforan glicerolu + tlen --(enzym oksydaza 3-fosforanu glicerolu ) --> fosforan dihydroksyacetonu + nadtlenek wodoru
4. Nadtlenek wodoru + 4- aminofenazon + 4- chlorofenol --( peroksydaza enzymatyczna )--> kompleks barwny

Mocznik

1. Mocznik + woda --(enzym ureaza ) --> węglan amonu
2. Węglan amonu + fenol + podchloryn ----> barwiony kompleks

W tym przypadku tylko pierwszy etap reakcji jest katalizowany przez enzym. Drugi etap jest nieenzymatyczny.

Skróty

• CHOD = oksydaza cholesterolowa
• BÓG = oksydaza glukozowa
• GPO = oksydaza glicerolo-3-fosforanowa
• PAP = fenol + aminofenazon (w niektórych metodach fenol jest zastępowany 4-chlorofenolem , który jest mniej toksyczny)
• Peryd = peroksydaza

Metody ultrafioletowe

W metodach ultrafioletowych (UV) nie ma widocznej zmiany barwy, ale zasada jest dokładnie taka sama, tj. pomiar zmiany absorbancji roztworu. Metody UV zwykle mierzą różnicę absorbancji przy długości fali 340 nm między dinukleotydem nikotynoamidoadeninowym (NAD) a jego formą zredukowaną (NADH).

Przykłady

pirogronian

Pirogronian + NADH --(enzym dehydrogenazy mleczanowej ) --> L-mleczan + NAD

Zobacz też

• Stężenie cukru we krwi
• Test MBAS , test , który wskazuje anionowe środki powierzchniowo czynne w wodzie z reakcją niebieszczenia.
• Cylinder Nesslera