Blot (biologia)
Blot , w biologii molekularnej i genetyce , jest metodą przenoszenia białek , DNA lub RNA na nośnik (na przykład membranę nitrocelulozową , polifluorku winylidenu lub nylonu ). W wielu przypadkach odbywa się to po elektroforezie żelowej , przeniesieniu cząsteczek z żelu na blotting membranowy , a innym razem po dodaniu próbek bezpośrednio na membranę. Po blottingu, przeniesione białka, DNA lub RNA są następnie wizualizowane przez barwienie barwnikiem (na przykład barwienie białek srebrem), autoradiograficzną wizualizację znakowanych radioaktywnie cząsteczek (przeprowadzaną przed blotem) lub specyficzne znakowanie niektórych białek lub kwasów nukleinowych . To ostatnie odbywa się za pomocą przeciwciał lub sond hybrydyzacyjnych , które wiążą się tylko z niektórymi cząsteczkami blotu i mają do nich przyłączony enzym . Po odpowiednim przemyciu, ta aktywność enzymatyczna (a więc molekuły, które przeszukujemy w blocie) jest wizualizowana przez inkubację z odpowiednimi reagentami, dając albo barwny osad na blocie, albo reakcję chemiluminescencyjną rejestrowaną przez kliszę fotograficzną .
Southern blot
Southern blot to metoda rutynowo stosowana w biologii molekularnej do wykrywania określonej sekwencji DNA w próbkach DNA. Southern blotting łączy przeniesienie fragmentów DNA rozdzielonych metodą elektroforezy na membranę filtra, a następnie wykrywanie fragmentów przez hybrydyzację sondy.
Western blot
Western blot służy do wykrywania określonych białek w złożonych próbkach. Białka najpierw rozdziela się według wielkości za pomocą elektroforezy, po czym przenosi się je na odpowiednią matrycę do blottingu (zwykle fluorek poliwinylidenu lub nitroceluloza ), a następnie wykrywa za pomocą przeciwciał.
Farwestern blot
Podobnie jak western blot , daleko-western blot wykorzystuje interakcje białko-białko do wykrywania obecności określonego białka unieruchomionego na matrycy blottingu. Przeciwciała są następnie używane do wykrywania obecności kompleksu białko-białko, co sprawia, że metoda Far-Western blot jest szczególnym przypadkiem metody Western blot.
Plamka południowo-zachodnia
Blot południowo-zachodni oparty jest na błocie Southern i służy do identyfikacji i charakteryzowania białek wiążących DNA na podstawie ich zdolności do wiązania się z określonymi sondami oligonukleotydowymi. Białka są rozdzielane za pomocą elektroforezy żelowej, a następnie przenoszone na membrany nitrocelulozowe, podobnie jak inne rodzaje blottingu.
plama wschodnia
Metoda Eastern blot służy do wykrywania specyficznych modyfikacji potranslacyjnych białek. Białka są rozdzielane za pomocą elektroforezy żelowej przed przeniesieniem na matrycę do blottingu, po czym modyfikacje potranslacyjne są wykrywane przez specyficzne substraty (toksyna cholery, konkanawalina, fosfomolibdenian itp.) lub przeciwciała.
Dalekowschodnia plama
Far -eastern blot służy do wykrywania oligosacharydów związanych z lipidami . Najpierw stosuje się wysokosprawną chromatografię cienkowarstwową do rozdzielenia lipidów na podstawie właściwości fizycznych i chemicznych, a następnie przenosi się je na matrycę do blottingu, zanim oligosacharydy zostaną wykryte przez specyficzne białko wiążące (tj. przeciwciała lub lektyny) .
Northern blot
Metoda Northern blot służy do wykrywania określonych sekwencji RNA w złożonych próbkach. Metoda Northern blotting najpierw rozdziela próbki według wielkości za pomocą elektroforezy żelowej, zanim zostaną one przeniesione na matrycę do blottingu i wykryte za pomocą znakowanych sond RNA.
Odwrócona metoda Northern blot
Odwrotna metoda Northern blot różni się zarówno od metody Northern, jak i Southern blot tym, że DNA jest najpierw unieruchamiane na matrycy do blottingu, a określone sekwencje są wykrywane za pomocą znakowanych sond RNA.
plama kropkowa
Dot blot to szczególny przypadek któregokolwiek z powyższych blotów, w którym analit jest dodawany bezpośrednio do matrycy do blottingu (i pojawia się jako „kropka”), w przeciwieństwie do rozdzielania próbki za pomocą elektroforezy przed blottingiem.
Lista plam
- Southern blot dla DNA
- Northern Błot dla RNA
- odwrócona metoda Northern blot dla RNA
- western blot dla białek
- far-western blot dla interakcji białko-białko
- Eastern blot pod kątem modyfikacji potranslacyjnych
- dalekowschodnia blot dla glikolipidów
- kropka