ColE1

ColE1 to plazmid występujący w bakteriach . Jego nazwa wywodzi się z faktu, że zawiera gen kolicyny E1 ( gen cea ). Koduje również odporność na ten produkt z imm . Ponadto plazmid ma szereg genów ruchliwości ( mob ). Jego rozmiar i obecność pojedynczego miejsca rozpoznawania EcoRI sprawiły, że został uznany za kandydata na wektor .

Replikacja

Replikacja ColE1 rozpoczyna się w miejscu pochodzenia . 555 bp powyżej tego punktu polimeraza RNA inicjuje transkrypcję RNAII, który działa jako starter wstępny i rozpoczyna syntezę nici liderowej . Transkrypt fałduje się w strukturę drugorzędową, która stabilizuje interakcję między powstającym RNA a pierwotnym DNA. Ta hybryda jest atakowana przez RNazę H , która rozszczepia nić RNA, odsłaniając grupę hydroksylową 3'. Pozwala to na wydłużenie nici wiodącej przez polimerazę I DNA . Synteza nici opóźnionej jest później inicjowana przez prymazę kodowaną przez komórkę gospodarza. Replikacja jest przeprowadzana całkowicie przez białka gospodarza (polimerazę RNA, polimerazę DNA I i RNazę H), więc hamowanie translacji zatrzymuje wzrost komórek, ale nie replikację ColE1. Ponieważ translacja białka Rop również zostanie zahamowana, w tych komórkach powstanie wyższa niż normalna liczba kopii.

Kontrola liczby kopii

RNAI jest kontr-transkryptem do odcinka RNAII, a więc wiąże się z jego końcem 5'. Zmienia to fałdowanie RNAII, tak że hybryda DNA-RNA nie jest stabilizowana i nie następuje cięcie. Zapewnia to, że przy dużej liczbie kopii replikacja jest spowolniona z powodu zwiększonego stężenia RNAI. Rop jest wtórnym represorem replikacji, stabilizuje hybrydę RNAI-RNAII. Rop może być szczególnie ważny w zapobieganiu niekontrolowanej replikacji przy powolnym tempie wzrostu.

ColE1 ma liczbę egzemplarzy 25-30 zgodnie z pierwotną publikacją