Elutriacja odśrodkowa w przeciwprądzie

Elutriacja odśrodkowa w przepływie przeciwprądowym ( CCE ) to technika klarowania cieczy. Ta metoda umożliwia naukowcom rozdzielenie różnych komórek o różnych rozmiarach. Ponieważ rozmiar komórki jest skorelowany z cyklu komórkowego, metoda ta umożliwia również rozdzielenie komórek na różnych etapach cyklu komórkowego.

Zasada

Kluczową koncepcją jest to, że większe komórki mają tendencję do pozostawania w przepływającym roztworze buforowym , podczas gdy mniejsze komórki będą wypłukiwane po roztworze buforowym (inne właściwości sedymentacji w roztworze buforowym), a komórki będą miały różne właściwości sedymentacyjne na różnych etapach cyklu komórkowego.

Podstawową zasadą rozdzielania komórek wewnątrz CCE jest równowaga między siłą dośrodkową i przeciwprądową. Kiedy komórki wejdą do komory elutriacyjnej, wszystkie komórki pozostaną na zewnętrznej krawędzi komory z powodu siły odśrodkowej. Następnie, gdy szybkość przepływu roztworu buforowego wzrasta, roztwór ma tendencję do popychania komórek w kierunku środka CCE. Kiedy siła oporu przeciwprądu przewyższa siłę dośrodkową, cząstki będą napędzane siłą wypadkową i opuszczają komorę. Mniejsze cząstki są w stanie opuścić komorę przy niższych prędkościach przepływu. Natomiast większe cząsteczki pozostaną w komorze elutriacyjnej. Dlatego szybkość przepływu buforu może być wykorzystana do kontrolowania sortowania według wielkości w komorze elutriacyjnej.

Zalety

Podczas separacji wystarczy zawiesić komórkę w roztworze buforowym i wprowadzić do wirówki , cały proces nie wiąże się z żadnym oddziaływaniem chemicznym (np. barwienie) i fizycznym (np. przywieranie przeciwciała, lizowanie błony komórkowej) na komórki, więc komórka pozostanie niezmieniona przed i po separacji. Z tego powodu zebrane komórki mogą być wykorzystane do dalszych eksperymentów lub dalszej separacji innymi technikami. Wreszcie, CCE polegają na sile odśrodkowej i sile oporu przeciwprądu, aby oddzielić komórki, więc prędkość separacji jest duża. W podsumowaniu:

• Minimalny wpływ na komórki
• Wysoka żywotność odzysku
• Oddzielone komórki mogą być dalej używane
• Szybki

Niedogodności

Jak wspomniano powyżej, CCE oddziela komórki na podstawie ich właściwości sedymentacyjnych, ale nie na podstawie specyficznych cech (np. białka powierzchniowego, kształtu komórki). Nie może rozdzielić różnych typów komórek, które mają podobne właściwości sedymentacyjne. Oznacza to, że dla próbki o mieszanym typie komórek należy przeprowadzić wcześniejsze oczyszczanie. CCE ogranicza się również do komórek, które można indywidualnie zawieszać w roztworze buforowym. Komórki, które zawsze przyczepiają się do czegoś, nie mogą być rozdzielone przez CCE.