MassTag-PCR

MassTag PCR to modyfikacja PCR oparta na wykrywaniu produktu końcowego za pomocą spektrometrii mas . Pionierem tej technologii był naukowiec z Centrum Zakażeń i Odporności (CII) Mailman School of Public Health na Uniwersytecie Columbia w USA.

Zasady

Podobnie jak konwencjonalny PCR, MassTag-PCR wykorzystuje pary starterów . Różnica polega na tym, że startery stosowane w MassTag PCR są znakowane cząsteczkami o znanych masach lub kodami masowymi. Zamiast pojedynczej pary starterów technologia ta wykorzystuje szereg starterów, co czyni ją systemem multipleksowym. W przeciwieństwie do konwencjonalnego systemu Multiplex PCR, w MassTag PCR można użyć więcej niż 15 par starterów. Jeśli DNA z któregokolwiek czynnika z panelu starterów jest obecny, zostanie zamplifikowany. Każdy amplifikowany produkt będzie miał swoje specyficzne kody masowe. Produkt PCR jest następnie oczyszczany w celu usunięcia niezwiązanych starterów, dNTP, enzymów i innych zanieczyszczeń. Na koniec oczyszczone produkty PCR poddaje się działaniu UV , ponieważ wiązanie chemiczne między kwasami nukleinowymi a starterami jest fotolabilne . Gdy kody masowe są uwalniane z produktów PCR, są wykrywane za pomocą spektrometru masowego. Obecność określonego MassCode wskazuje na obecność określonego patogenu.

Aplikacje

Stwierdzono, że ta technika wykrywa wcześniej niescharakteryzowany klad rinowirusa . MassTag PCR jest bardziej wszechstronną i czułą techniką diagnostyczną, CII był w stanie określić przyczynę tej choroby w 26 z 79 wcześniej nieznanych przypadków. MassTag PCR wykazał swoją trójstronną wartość jako narzędzie do nadzoru, wykrywania ognisk i epidemiologii .