Rozcieńczenie agaru

Rozcieńczanie agarowe jest jedną z dwóch metod (obok rozcieńczania bulionu) stosowanych przez naukowców do określania minimalnego stężenia hamującego (MIC) antybiotyków. Jest to metoda rozcieńczania najczęściej stosowana do testowania skuteczności nowych antybiotyków, gdy kilka antybiotyków jest testowanych na dużym panelu różnych bakterii.

Proces

Testowany antybiotyk rozcieńcza się wodą w celu uzyskania serii stężeń. Następnie odpowiednią objętość łączy się ze stopionym agarem w celu wytworzenia płytek, na których końcowe stężenia antybiotyku odpowiadają serii 2-krotnych rozcieńczeń. Następnie bakterie przygotowane do standardowego stężenia dodaje się jako plamkę na każdą płytkę, z 104 ^jednostkami tworzącymi kolonie (CFU) na plamkę. Technika ta umożliwia testowanie powtórzeń plam jednego rodzaju bakterii lub plam różnych bakterii, dzięki czemu można zbadać MIC antybiotyku wobec wielu rodzajów bakterii. Niezbędne kontrole obejmują płytkę kontrolną, która nie otrzymuje żadnych antybiotyków, oraz płytki do posiewu bakteryjnego wykazujące, że zawarte bakterie znajdują się w odpowiednim zakresie stężeń. Następnie płytki do rozcieńczeń inkubuje się w temperaturze 37 stopni Celsjusza . Płytki są następnie inkubowane przez szesnaście do osiemnastu godzin, chociaż czas inkubacji może być krótszy w przypadku populacji bakterii, które dzielą się szybko. Po inkubacji płytki bada się w celu określenia, czy w zaszczepionych miejscach wystąpił wzrost bakterii. Najniższe stężenie antybiotyków, które zapobiegło wzrostowi bakterii, jest uważane za minimalne stężenie hamujące tego antybiotyku przeciwko tej bakterii.

Zalety

Rozcieńczenie agarem jest uważane za złoty standard oznaczania wrażliwości lub najdokładniejszy sposób pomiaru oporności bakterii na antybiotyki. Wyniki rozcieńczania agarem są łatwe do odtworzenia i mogą być monitorowane przy znacznie niższych kosztach niż jest to wymagane w przypadku innych metod rozcieńczania. Dodatkowo, jednocześnie można przetestować do trzydziestu próbek patogenów (plus dwie kontrole), więc rozcieńczenie agaru jest przydatne w testach wsadowych.

Niedogodności

Każda płytka z rozcieńczeniami w teście agarowym musi być ręcznie zaszczepiona testowanym patogenem, więc testowanie rozcieńczeń agarowych jest zarówno pracochłonne, jak i drogie. W przeciwieństwie do mikrorozcieńczeń bulionowych , rozcieńczeń agarowych nie można używać do testowania więcej niż jednego antybiotyku na raz.