Test neutralizacji redukcji płytki nazębnej
Test neutralizacji redukcji łysinek jest stosowany do ilościowego określenia miana neutralizującego przeciwciała dla wirusa.
Próbkę surowicy lub roztwór testowanego przeciwciała rozcieńcza się i miesza z zawiesiną wirusa. Jest to inkubowane, aby umożliwić przeciwciału reakcję z wirusem. Wylewa się to na zlewającą się pojedynczą warstwę komórek gospodarza. Powierzchnia warstwy komórek jest pokryta warstwą agaru lub karboksymetylocelulozy, aby zapobiec rozprzestrzenianiu się wirusa bez wyjątku. Stężenie jednostek tworzących płytki można oszacować na podstawie liczby płytek (obszary zainfekowanych komórek) powstały po kilku dniach. W zależności od wirusa, jednostki tworzące łysinki są mierzone za pomocą obserwacji mikroskopowej, przeciwciał fluorescencyjnych lub specyficznych barwników, które reagują z zakażonymi komórkami.
Stężenie surowicy zmniejszające liczbę łysinek o 50% w porównaniu z wirusem wolnym od surowicy jest miarą ilości obecnego przeciwciała lub jego skuteczności. Ten pomiar jest oznaczony jako wartość PRNT 50 .
Obecnie jest uważany za „złoty standard” wykrywania i pomiaru przeciwciał, które mogą neutralizować wirusy wywołujące wiele chorób. Ma wyższą czułość niż inne testy, takie jak hemaglutynacja i wiele komercyjnych testów immunoenzymatycznych bez uszczerbku dla swoistości . Ponadto jest bardziej specyficzna niż inne metody serologiczne w diagnostyce niektórych arbowirusów.
Jednak test jest stosunkowo uciążliwy i czasochłonny (kilka dni) w porównaniu z zestawami EIA, które dają szybkie wyniki (zwykle od kilku minut do kilku godzin).
Problem z tym testem, który został ostatnio zidentyfikowany, polega na tym, że zdolność przeciwciał do neutralizacji zależy od stanu dojrzewania wirionu i rodzaju komórek użytych w teście. Dlatego też, jeśli do testu zostanie użyta niewłaściwa linia komórkowa, może się wydawać, że przeciwciała mają zdolność neutralizacji, podczas gdy w rzeczywistości jej nie mają, lub odwrotnie, mogą wydawać się nieskuteczne, gdy faktycznie posiadają zdolność neutralizacji. [ potrzebne źródło ]
Zobacz też
- ELISA – Metoda wykrywania antygenu przy użyciu przeciwciała i enzymu
- Kompleks immunologiczny - Utworzona cząsteczka wiążąca antygeny z przeciwciałami
- Kwantyfikacja wirusa za pomocą testu łysinkowego