Suszona plama krwi
Test suszonej plamki krwi (DBS) jest formą pobierania próbek biologicznych, w której próbki krwi są osuszane na bibule filtracyjnej. Wysuszone próbki można łatwo wysłać do laboratorium analitycznego i poddać analizie różnymi metodami, takimi jak amplifikacja DNA lub HPLC .
Historia
Ivar Bang po raz pierwszy opisał DBS jako niezwykłą metodę pobierania próbek w 1913 r. Koncepcja, że krew włośniczkowa, uzyskana z nakłucia pięty lub palca i przeniesiona na bibułę filtracyjną, może być wykorzystana do badań przesiewowych w kierunku chorób metabolicznych u dużych populacji noworodków została wprowadzona w Szkocji przez Roberta Guthrie w 1963 r. Badania przesiewowe noworodków w kierunku fenyloketonurii stały się ogólnokrajowe w latach 1969–70. Od tego czasu Guthriego były rutynowo pobierane od niemowląt w ponad 20 krajach w celu badania przesiewowego w kierunku fenyloketonurii, a ostatnio w kierunku wrodzonej niedoczynności tarczycy , niedokrwistości sierpowatokrwinkowej i zakażenia wirusem HIV. Ograniczenia czułości i swoistości przy skriningu tak małych objętości krwi przez wiele lat ograniczały stosowanie wysuszonych plam krwi. Jednak ostatnie postępy, takie jak produkcja przeciwciał monoklonalnych , ekspresja białek syntetycznych i wprowadzenie reakcji łańcuchowej polimerazy, przezwyciężyły wiele z tych problemów.
Ten rodzaj badania krwi jest obecnie dostępny do użytku domowego przez konsumentów w USA. Dostępne badania krwi obejmują witaminę D, estrogen, testosteron, kortyzol, TSH i lipidy. Nowy Jork jest jedynym stanem, w którym zabrania się wykonywania domowych testów krwi. [ potrzebne źródło ]
Procedura
Wysuszone próbki krwi pobiera się przez nałożenie kilku kropel krwi, pobranych lancetem z palca, pięty lub stopy, na specjalnie wyprodukowaną chłonną bibułę filtracyjną. Krew pozostawia się do dokładnego nasycenia bibuły i suszy na powietrzu przez kilka godzin. Próbki są przechowywane w plastikowych torebkach o niskiej przepuszczalności gazów z środka osuszającego w celu zmniejszenia wilgotności i mogą być przechowywane w temperaturze otoczenia, nawet w klimacie tropikalnym. [ potrzebne źródło ]
W laboratorium technicy oddzielają mały krążek nasyconego papieru od arkusza za pomocą automatycznego lub ręcznego dziurkacza, wrzucając krążek do płaskodennej płytki do mikromiareczkowania. Krew eluuje się solą fizjologiczną buforowaną fosforanami, zawierającą 0,05% Tween 80 i 0,005% azydku sodu , przez noc w temperaturze 4°C. Otrzymana płytka zawierająca eluaty tworzy „wzorcową”, z której można wykonać rozcieńczenia do dalszych badań.
Jako alternatywę dla wykrawania krążka papieru, najnowsze rozwiązania w zakresie automatyzacji ekstrahują próbkę poprzez przepłukiwanie eluentu przez filtr bez wybijania go. Automatyka obejmująca zastosowanie wewnętrznego wzorca przed ekstrakcją została opracowana przez szwajcarską firmę CAMAG.
Test z suszonej krwi na obecność wirusa HIV
Technologia daje nadzieję na rozszerzenie usług diagnostycznych na niemowlęta zakażone wirusem HIV w warunkach ubogich w zasoby ze względu na dłuższą żywotność próbek przy zmniejszonym zapotrzebowaniu na chłodzenie i mniej inwazyjny charakter testu w porównaniu z innymi metodami. W przeciwieństwie do ELISA na obecność przeciwciał HIV we krwi, które mogą być przenoszone na niemowlęta w ciąży niezależnie od samego wirusa, testy z wysuszoną plamką krwi można wykorzystać do wykrycia materiału genetycznego rzeczywistego wirusa, unikając w ten sposób prawdopodobieństwa uzyskania fałszywie dodatniego wyniku . Testy na obecność wirusa HIV z suchej plamki krwi nie są uważane za wystarczająco czułe do testów diagnostycznych, ale mogą być przydatne w szacowaniu częstości występowania wirusa HIV poprzez obserwację. Próbki DBS stanowią również mniejsze zagrożenie biologiczne dla osób zajmujących się nimi i są łatwiejsze w transporcie lub przechowywaniu niż próbki krwi w płynie.
Suszona plama krwi dla Biobanku
DBS są atrakcyjne dla biobanku ze względu na niski koszt i łatwość w użyciu gromadzenia i przechowywania. Badanie wykazało, że dawcy mogli z łatwością zebrać dużą liczbę wysuszonych próbek krwi. Potencjalna wartość medyczna takich biobanków jest ogromna ze względu na ich zdolność do wykrywania poziomu białka i innych biomarkerów krwi.
Zasada
Przyczyną stabilności DNA, RNA lub białka może być fakt, że materiał biologiczny wiąże się z matrycą bibuły filtracyjnej, a proces suszenia wyklucza wodę, która jest ważnym czynnikiem niezbędnym do działania proteazy lub nukleazy. Wiązanie materiału biologicznego wiąże również kilka inhibitorów, które mogą zakłócać różne metody amplifikacji kwasów nukleinowych. [ potrzebne źródło ]