Bulion fosforanowo-glukozowy

Bulion glukozofosforanowy służy do wykonywania testu czerwieni metylowej (MR) i testu Vogesa Proskauera (VP).

Zawartość

Glukoza - 5 g/L Fosforan dipotasowy - 5 g/L Proteoza Pepton - 5 g/L Woda destylowana - 1000 ml pH – 6,9

Test czerwieni metylowej

Zasada: Służy do określenia zdolności organizmu do wytwarzania mieszanych kwasów w wyniku fermentacji glukozy oraz do pokonania zdolności buforowych pożywki.

Procedura

Zaszczepić MacConkey's (bulion fosforanowo-glukozowy) czystą kulturą organizmu testowego. Inkubować bulion w temperaturze 35°C przez 48–72 godzin. Po inkubacji dodać 5 kropli czerwieni metylowej bezpośrednio do bulionu przez ścianki probówki.

Interpretacja

Pojawienie się trwałego czerwonego zabarwienia na powierzchni pożywki wskazuje na wystarczającą produkcję kwasu do obniżenia pH do 4,4 i stanowi pozytywny wynik testu. Ponieważ inne organizmy mogą wytwarzać mniejsze ilości kwasu z podłoża testowego , może powstać pośredni kolor pomarańczowy między żółtym a czerwonym. Nie oznacza to pozytywnego wyniku testu.

Sterownica

Kontrole pozytywne i negatywne należy przeprowadzić po przygotowaniu każdej partii pożywki. Kontrola pozytywna: Escherichia coli Kontrola negatywna: Klebsiella

Test Vogesa Proskauera

Zasada

Służy do określania zdolności niektórych organizmów do wytwarzania obojętnego produktu końcowego, acetylometylokarbinolu ( acetoiny ) z fermentacji glukozy. Produkcja acetoiny, neutralnie reagującego produktu końcowego wytwarzanego przez członków takich jak Klebsiella, Enterobacter itp., jest głównym produktem końcowym metabolizmu glukozy i tworzy mniejsze ilości mieszanych kwasów. W obecności tlenu atmosferycznego i 40% KOH acetoina jest przekształcana w diacetyl , a α-naftol służy jako katalizator do wydobycia czerwonego kompleksu barwnego.

Głoska bezdźwięczna

bulion fosforanowo-glukozowy

Odczynniki

A: α-Naftol – 5 g Bezwodny alkohol etylowy – 100 ml – 0,6 ml – 3 części B: KOH – 40 g Woda destylowana – 100 ml – 0,2 ml – 1 część

Procedura

Zaszczepić probówkę z bulionem glukozofosforanowym czystym inokulum organizmu testowego i inkubować w temperaturze 35 °C przez 24 godziny. Do 1 ml tego bulionu dodać 0,6 ml 5% α-naftolu, a następnie 0,2 ml 40% KOH. Delikatnie potrząśnij probówką, aby wystawić pożywkę na działanie tlenu atmosferycznego i pozostaw probówkę w spokoju przez 10–15 minut.

Interpretacja

Pozytywny wynik testu jest reprezentowany przez pojawienie się czerwonego zabarwienia w ciągu 15 minut lub dłużej po dodaniu odczynników , co wskazuje na obecność diacetylu, produktu utleniania acetoiny. Test powinien być czerwony po odstawieniu na 1 godzinę, ponieważ ujemne hodowle VP mogą dawać miedziane zabarwienie, co może skutkować fałszywie dodatnią interpretacją, również z powodu działania odczynników po zmieszaniu.

Sterownica

Kontrole pozytywne i negatywne należy przeprowadzić po przygotowaniu każdej partii pożywki. Kontrola pozytywna: Klebsiella Kontrola negatywna: Escherichia coli