Chimeryczna nukleaza
Chimeryczne nukleazy są przykładem zmodyfikowanych białek , które muszą zawierać domenę wiążącą DNA, aby zapewnić specyficzność sekwencji i domenę nukleazy do rozszczepienia DNA .
Domeny wiążące DNA
Domeny wiążące DNA, w tym motywy podstawowa helisa-pętla-helisa , palec cynkowy , helisa-obrót-helisa i zamek leucynowy , zostały wykorzystane do konstrukcji nukleaz specyficznych dla sekwencji. Spośród nich za najważniejsze uznano palce cynkowe ze względu na ich modułowość, umożliwiającą skonstruowanie dostosowanej domeny wiążącej DNA.
Domena nukleazowa
Domena nukleazy jest odpowiedzialna za fizyczne rozszczepianie nici DNA i może wprowadzać pęknięcia jednoniciowe lub dwuniciowe. FokI jest przykładem endonukleazy specyficznej dla sekwencji , której niespecyficzna domena nukleazy wprowadza pęknięcia dwuniciowe i została wykorzystana w różnych eksperymentach, w tym do identyfikacji miejsc wiązania czynników transkrypcyjnych o wysokim i niskim powinowactwie in vitro , do badania rekrutacji czynników dla miejsc promotorowych in vivo przy użyciu identyfikacji pozycji białka za pomocą testu ogona nukleazy oraz do badania białek specyficznych dla interakcji z DNA w konformacji Z-DNA (Durai i in., 2005 i odniesienia tam zawarte).
Zobacz też
- ^ Durai S, Mani M, Kandavelou K, Wu J, Porteus MH, Chandrasegaran S (2005). „Nukleazy palca cynkowego: specjalnie zaprojektowane nożyczki molekularne do inżynierii genomu komórek roślinnych i ssaków” . Kwasy nukleinowe Res . 33 (18): 5978–90. doi : 10.1093/nar/gki912 . PMC 1270952 . PMID 16251401 .