Ekstrakcja RNA

Ekstrakcja RNA to oczyszczanie RNA z próbek biologicznych. Procedurę tę komplikuje wszechobecna obecność rybonukleazy w komórkach i tkankach, które mogą szybko rozkładać RNA. W biologii molekularnej stosuje się kilka metod izolowania RNA z próbek, z których najpowszechniejszą jest ekstrakcja tiocyjanianem guanidyny-fenolu-chloroformem . Metoda lizy i elucji oparta na bibule filtracyjnej charakteryzuje się wysoką przepustowością.

Ekstrakcja RNA w ciekłym azocie, zwykle przy użyciu moździerza i tłuczka (lub specjalistycznych urządzeń stalowych zwanych rozdrabniaczami tkanek), jest również przydatna w zapobieganiu aktywności rybonukleazy.

Zanieczyszczenie RNazami

Ekstrakcja RNA w eksperymentach biologii molekularnej jest bardzo skomplikowana ze względu na obecność wszechobecnych i odpornych RNaz, które degradują próbki RNA. Niektóre RNazy mogą być niezwykle odporne, a ich dezaktywacja jest trudna w porównaniu do neutralizacji DNaz . Oprócz RNaz komórkowych, które są uwalniane, w środowisku obecnych jest kilka RNaz. RNazy ewoluowały, aby pełnić wiele funkcji pozakomórkowych w różnych organizmach. Na przykład RNaza 7, członek nadrodziny RNazy A , jest wydzielana przez ludzką skórę i służy jako silna obrona przed patogenami. W przypadku tych wydzielanych RNaz aktywność enzymatyczna może nawet nie być konieczna dla RNaz rozszerzona funkcja. Na przykład, immunologiczne RNazy działają poprzez destabilizację błon komórkowych bakterii.

Aby temu przeciwdziałać, sprzęt używany do ekstrakcji RNA jest zwykle dokładnie czyszczony, trzymany oddzielnie od zwykłego sprzętu laboratoryjnego i traktowany różnymi ostrymi chemikaliami, które niszczą RNazy. Z tego samego powodu eksperymentatorzy zachowują szczególną ostrożność, aby ich naga skóra nie dotykała sprzętu.

Zobacz też

Linki zewnętrzne

Płukanie dwufazowe w celu rozwiązania wszechobecnego problemu przenoszenia zanieczyszczeń w komercyjnych zestawach do ekstrakcji kwasów nukleinowych ; autorstwa Erika Jue, Daana Wittersa i Rustema F. Ismagilova; Przyroda, Doniesienia naukowe, 2020.