Korelacyjna mikroskopia świetlno-elektronowa

Korelacyjna mikroskopia świetlno-elektronowa ( CLEM ) to połączenie mikroskopu optycznego – zwykle mikroskopu fluorescencyjnego – z mikroskopem elektronowym . W zintegrowanym systemie CLEM próbka jest obrazowana za pomocą wiązki elektronów i ścieżki światła optycznego jednocześnie. Tradycyjnie próbki byłyby obrazowane przy użyciu dwóch oddzielnych metod mikroskopii, potencjalnie w różnych obiektach i przy użyciu różnych metod przygotowania próbek. Zintegrowany CLEM jest zatem uważany za korzystny, ponieważ metodologia jest szybsza i łatwiejsza oraz zmniejsza szansę na zmiany w próbie podczas procesu zbierania danych. Nakładanie dwóch obrazów odbywa się więc automatycznie w wyniku integracji dwóch mikroskopów.

Technikę tę stosuje się w celu uzyskania informacji w różnych skalach długości: mikroskop elektronowy zapewnia informacje o wysokiej rozdzielczości aż do nanoskali, podczas gdy mikroskop fluorescencyjny uwydatnia obszary zainteresowania. CLEM jest używany w różnych dyscyplinach nauk przyrodniczych , w tym neuronauce , badaniach tkanek i badaniach białek .

Mikroskop fluorescencyjny

W przygotowaniu do obrazowania za pomocą mikroskopu fluorescencyjnego można zastosować różne metody, takie jak fluorofory lub barwniki, znakowanie immunologiczne i genetycznie kodowane białka fluorescencyjne. Można zastosować różne znaczniki fluorescencyjne w celu podkreślenia wielu interesujących obszarów w próbce. Ostatnio Kumar i wsp. połączyli pomiary napięcia molekularnego oparte na FRET z mikroskopią krioelektronową, aby zbadać, w jaki sposób siła działająca na talin (ogniskowe białko adhezyjne, które bezpośrednio łączy integryny z aktyną) jest związana z organizacją aktyny. Regiony o wysokim napięciu talinowym mają wysoce wyrównaną i liniową nitkowatą aktynę, podczas gdy regiony o niskim napięciu mają mniej wyrównaną strukturę aktyny.

Mikroskop elektronowy

Mikroskop elektronowy służy do uzyskiwania informacji strukturalnych w nanoskali. W przeciwieństwie do mikroskopu optycznego, mikroskop elektronowy jest w stanie przekroczyć granicę dyfrakcji światła. Dzieje się tak, ponieważ długość fali przyspieszanych elektronów jest znacznie krótsza niż długość fali światła widzialnego.

Dalsza lektura

•   Sueters - Di Meo, Josey; Liv, Nalan; Hoogenboom, Jacob P. (2016). „Wykorzystanie zaawansowanej mikroskopii korelacyjnej do badania złożonych próbek biologicznych”. Encyklopedia chemii analitycznej . s. 1–31. doi : 10.1002/9780470027318.a9473 . ISBN 9780470027318 .
•    Zonnevylle, AC; Van Tol, RFC; Liv, N.; Narvaez, AC; Effting, APJ; Kruit, P.; Hoogenboom, JP (2013). „Integracja mikroskopu świetlnego o wysokiej NA w skaningowym mikroskopie elektronowym” . Journal of Microscopy . 252 (1): 58–70. doi : 10.1111/jmi.12071 . ISSN 0022-2720 . PMID 23889193 .