Żółte białko fluorescencyjne
Żółte białko fluorescencyjne (YFP) jest genetycznym mutantem zielonego białka fluorescencyjnego (GFP), pochodzącego pierwotnie z meduzy Aequorea victoria . Jego pik wzbudzenia wynosi 513 nm, a pik emisji 527 nm. Podobnie jak macierzysty GFP, YFP jest użytecznym narzędziem w komórkowej i molekularnej, ponieważ piki wzbudzenia i emisji YFP można odróżnić od GFP, co pozwala na badanie wielu procesów / białek w ramach tego samego eksperymentu.
Trzy ulepszone wersje YFP to Citrine, Venus i Ypet. Mają zmniejszoną wrażliwość na chlorki, szybsze dojrzewanie i zwiększoną jasność (zdefiniowaną jako iloczyn współczynnika ekstynkcji i wydajności kwantowej ). Zazwyczaj YFP służy jako akceptor dla genetycznie zakodowanych FRET , z których najbardziej prawdopodobnym dawcą FP jest monomeryczne cyjanowe białko fluorescencyjne (mCFP). Przesunięcie ku czerwieni w stosunku do GFP jest spowodowane układania Pi-Pi w wyniku podstawienia T203Y wprowadzonego przez mutację, co zasadniczo zwiększa polaryzowalność lokalnego chromoforu środowiska, jak również zapewnia dodatkową gęstość elektronów w chromoforze.
„Wenus” zawiera nową substytucję aminokwasu – F46L–, która przyspiesza utlenianie chromoforu w temperaturze 37°C, co jest etapem ograniczającym szybkość dojrzewania. Białko ma inne substytucje (F64L/M153T/V163A/S175G), co pozwala Wenus na dobre fałdowanie i daje jej względną tolerancję na kwasicę i Cl- .
Ewolucja YFP z GFP
Do stworzenia mutanta YFP potrzebne były cztery mutacje białkowe z dzikiego GFP znalezionego w meduzie Aequorea Victoria. Najważniejszą mutacją było zastąpienie treoniny tyrozyną w pozycji reszty 203 (substytucja jest oznaczona przez T203Y, gdzie T i Y oznaczają jednoliterowy kod aminokwasów odpowiednio treoniny i tyrozyny).
Zobacz też
Linki zewnętrzne
- Wprowadzenie do białek fluorescencyjnych
- EYFP na FPbase
- Miyawaki, Atsushi; Llopis, Juan; Heim, Roger; McCaffery, J. Michael; Adams, Józef A.; Ikura, Mitsuhiko; Tsien, Roger Y. (1997). „Fluorescencyjne wskaźniki Ca2+ na bazie białek zielonej fluorescencji i kalmoduliny” . Natura . 388 (6645): 882–7. doi : 10.1038/42264 . PMID 9278050 .