Barwienie supravitalne

Supravital barwienie rozmazu krwi ludzkiej od pacjenta z niedokrwistością hemolityczną . Retikulocyty to komórki z ciemnoniebieskimi kropkami i zakrzywionymi liniowymi strukturami (retikulum) w cytoplazmie.

Barwienie Supravital to metoda barwienia stosowana w mikroskopii do badania żywych komórek, które zostały usunięte z organizmu. Różni się od barwienia dożylnego, które wykonuje się poprzez wstrzyknięcie lub inne wprowadzenie barwnika do organizmu. Tak więc barwienie nadżyciowe może mieć większą toksyczność , ponieważ tylko kilka komórek musi go przetrwać przez krótki czas. Określenie „ życiowa plama ” jest używane przez niektórych autorów w odniesieniu konkretnie do barwienia przyżyciowego, a przez innych zamiennie z barwieniem nadżyciowym, przy czym podstawową koncepcją jest to, że badana komórka wciąż żyje. Ponieważ komórki są żywe i nieutrwalone, poza ciałem, plamy nadżyciowe mają charakter tymczasowy.

Najczęstsze barwienie nadżyciowe przeprowadza się na retikulocytach przy użyciu nowego błękitu metylenowego lub brylantowego błękitu krezylowego , co umożliwia zobaczenie siateczkowatego wzoru rybosomów charakterystycznie wytrąconych w tych żywych niedojrzałych krwinkach czerwonych przez barwienie nadżyciowe. Licząc liczbę takich komórek, można określić tempo tworzenia się czerwonych krwinek, co daje wgląd w szpiku kostnego i anemię . Kontrastuje to z barwieniem przyżyciowym , gdy zastosowany barwnik jest wykluczony z żywych komórek, tak że tylko martwe komórki są wybarwiane pozytywnie. (Żywe barwniki obejmują barwniki, takie jak błękit trypanu i jodek propidyny , które są albo zbyt masywne, albo zbyt naładowane, aby przejść przez błonę komórkową, albo które są aktywnie szybko wypompowywane przez żywe komórki.)

Barwienie Supravital można łączyć z barwieniem przeciwciał na powierzchni komórki ( immunofluorescencja ) do zastosowań takich jak analiza FACS . Immunofluorescencję można również przeprowadzić we wnętrzu żywych komórek przez odwracalną przepuszczalność komórek przy użyciu detergentu Triton X-100 . Starannie dostosowana do odpowiedniego stężenia dla liczby komórek, wstępna obróbka może umożliwić dostęp cząsteczek od 1 do 150 kilodaltonów do wnętrza komórki. Chociaż w tym kontekście przeciwciała mogą być stosowane w podobny sposób, termin „barwienie nadżyciowe” jest zwykle zarezerwowany dla mniejszych substancji chemicznych, które same w sobie posiadają odpowiednie właściwości.

Przykłady popularnych barwników nadżyciowych

Supravital barwniki do erytrocytów:

• Nowy błękit metylenowy
• Błyszczący błękit krezylowy
• Krystaliczny fiolet
• Fiolet metylowy
• Błękit Nilu

• plama Hoechsta