FMRFamid w Biomphalaria glabrata
FMRFamid , neuropeptyd zaangażowany w regulację czynności serca, występuje w Biomphalaria glabrata , gatunku ślimaka słodkowodnego najlepiej znanego z roli żywiciela pośredniego przywry Schistosoma mansoni , zarażającego człowieka .
Ten gatunek ślimaka słodkowodnego jest używany jako organizm modelowy , innymi słowy, gatunek inny niż człowiek , który jest szeroko badany w celu zrozumienia zjawiska biologicznego , z oczekiwaniem, że odkrycia dokonane w modelu zapewnią wgląd w działanie innych organizmów. Organizmy modelowe są in vivo i są szeroko stosowane do badania chorób ludzi , gdy eksperymenty na ludziach byłyby niewykonalne lub nieetyczne .
Znaczenie
Ten ślimak był badany w odniesieniu do patologii człowieka i epidemiologii schistosomatozy . Wiadomo, że S. masoni zmienia zachowanie gospodarza ( B. glabrata ) poprzez regulację w górę / w dół neuropeptydów , takich jak schistosomina i NPY, a niektóre badania wykazały, że FMRFamid jest aminergiczny i może być zaangażowany w wydzielanie cząsteczek do reagować na infekcję pasożytami .
Zwojowy ośrodkowy układ nerwowy (OUN) B. glabrata składa się ze sparowanych zwojów mózgowych, pedałowych, opłucnowych, ciemieniowych i policzkowych oraz jednego niesparowanego zwoju trzewnego. FMRFamid jest skoncentrowany w zwojach mózgowych i trzewnych, chociaż dowody z obecnych badań sugerują, że FMRFamid przemieszcza się w dół obszaru głowy i stopy ślimaka w miarę postępu rozwoju embrionalnego.
Dokładna rola FMRFamidu podczas wczesnego rozwoju embrionalnego ośrodkowego układu nerwowego nie jest dobrze zbadana. Wykrywanie tego neuropeptydu jest ważne, ponieważ jego ekspresja kładzie podwaliny pod OUN we wczesnych stadiach rozwoju bezkręgowców. W ostatnich latach neuromodulacyjne działanie FMRFamidu na bezkręgowce stało się bardziej widoczne. Wynika to po części z szeroko zakrojonych badań przeprowadzonych na ślimakach błotnych z rodzin Planorbidae i Lymnaeidae .
Ekspresję FMRFamidu w B. glabrata można wykryć już po 72 godzinach, po rozszczepieniu. Badania wykazały jego wzór ekspresji w tylnej części zwojowego układu nerwowego, ponieważ pierwsza komórka immunoreaktywna na FMRFamid pojawia się w 25-28% rozwoju i znajduje się w skrajnie tylnej części zarodka. Komórka wysyła pojedynczy proces z każdej strony, a każdy proces podąża za krzywizną ciała.
Gdy procesy te wydłużają się, po obu stronach ściany ciała widoczne są dwie boczne komórki eksprymujące FMRFamid. Niektóre badania sugerują, że FMRFamid te struktury mogą unerwiać mięśnie, które pochodzą z larw trochoporów i rozszerzają się podczas rozwoju. Ten neuromodulator pomaga regulować czynność serca. Znanych jest kilka peptydów spokrewnionych z FMRFamidem, regulujących różne funkcje komórkowe i wykazujących działanie farmakologiczne, takie jak działanie przeciwopioidowe. FMRFamid może również odgrywać rolę w osmoregulacji i wzorcach rozwojowych. Ten neuropeoptyd ma wiele funkcji i kontroluje wiele procesów, które pozwalają zarodkowi dojrzeć do postaci dorosłego ślimaka.
Immunocytochemia FMRFamidu w zarodkach B. glabrata
Wzorzec FMRFamidu w trakcie życia embrionalnego został zarejestrowany za pomocą immunofluorescencji . Zarodki w 0 do 144 godzin (6 dni) po rozszczepieniu ekstrahowano z masy jajowej i utrwalano w 4% PFA przez 2 godziny w temperaturze pokojowej. Zarodki starsze niż 4 dni traktowano wstępnie 0,5% roztworem kwasu etylenodiaminotetraoctowego (EDTA) w PBS przez 5 minut w celu poprawy penetracji pierwotnego przeciwciała, a następnie utrwalano w 4% PFA przez 2 godziny w temperaturze pokojowej. Zarodki następnie płukano przez noc w 4% Triton X-100 w PBS i inkubowano w roztworze blokującym, 1% normalnej surowicy docelowej w PBS, przez noc w 4°C.
Po zablokowaniu przez noc, zarodki traktowano roztworem przeciwciał pierwszorzędowych w stosunku 1:2000 (w NGS/PBS). Drugorzędowe przeciwciało znakowane izotiocyjanianem fluoresceiny (FITC) skoniugowanym przeciw króliczej IgG (poliklonalne) inkubowano w 1:20 przez noc w 4°C. Zarodki następnie umieszczano na szkiełku i oglądano pod mikroskopem fluorescencyjnym.