Frakcjonowanie komórek
W biologii komórki frakcjonowanie komórek jest procesem stosowanym do oddzielania składników komórkowych przy jednoczesnym zachowaniu indywidualnych funkcji każdego składnika. Jest to metoda, która pierwotnie była używana do wykazania lokalizacji komórkowej różnych biochemicznych . Inne zastosowania frakcjonowania subkomórkowego to dostarczenie wzbogaconego źródła białka do dalszego oczyszczania i ułatwienie diagnozy różnych stanów chorobowych.
Homogenizacja
Tkanka jest zazwyczaj homogenizowana w roztworze buforowym , który jest izotoniczny , aby zatrzymać uszkodzenia osmotyczne. Mechanizmy homogenizacji obejmują mielenie, mielenie, siekanie, zmiany ciśnienia, szok osmotyczny , zamrażanie-rozmrażanie i ultradźwięki . Próbki są następnie utrzymywane w niskiej temperaturze, aby zapobiec uszkodzeniom enzymatycznym. Jest to tworzenie jednorodnej masy komórek (homogenatu komórkowego lub zawiesiny komórkowej ). Polega na rozdrabnianiu komórek w odpowiednim podłożu w obecności określonych enzymów o odpowiednim pH, składzie jonowym i temperaturze. Na przykład pektynaza , która trawi środkową blaszkę wśród komórek roślinnych.
Filtrowanie
Ten krok może nie być konieczny w zależności od źródła pochodzenia komórek . Tkanka zwierzęca może jednak dawać tkankę łączną, którą należy usunąć. Zwykle filtrację uzyskuje się przez przelanie przez gazę lub za pomocą filtra ssącego i odpowiedniego filtra ceramicznego.
Oczyszczenie
Oczyszczanie uzyskuje się przez wirowanie różnicowe – sekwencyjny wzrost siły grawitacji powoduje sekwencyjne rozdzielanie organelli według ich gęstości .
Zobacz też
Pożywki do rozdzielania komórek według gęstości: