Ofiowirus łuszczycy owoców cytrusowych
|
|
| Ofiowirus łuszczycy owoców cytrusowych | |
|---|---|
| Mikrografia elektronowa ofiowirusa łuszczycy owoców cytrusowych | |
| Klasyfikacja wirusów | |
| (nierankingowe): | Wirus |
| królestwo : | Rybowiria |
| Królestwo: | Orthornawirusy |
| Gromada: | Negarnaviricota |
| Klasa: | Milneviricetes |
| Zamówienie: | serpentowirusy |
| Rodzina: | Aspiviridae |
| Rodzaj: | Ofiowirus |
| Gatunek: |
Ofiowirus łuszczycy owoców cytrusowych
|
| Synonimy | |
|
Wirus łuszczycy owoców cytrusowych |
|
Ofiowirus łuszczycy owoców cytrusowych jest wirusem chorobotwórczym dla roślin , infekującym rośliny cytrusowe na całym świecie. Jest uważany za najpoważniejszy i najbardziej szkodliwy patogen wirusowy tych drzew.
Choroba łuszczycy
Łuszczyca obejmuje różne choroby przenoszone przez przeszczepy, z których wszystkie mogą być związane z różnymi szczepami patogennymi, w tym łagodniejszymi CPs-VA i cięższymi CPsV-B. Wirus charakteryzuje się jednoniciową cząsteczką RNA z białkiem płaszcza o masie 48 kDa i spiralną strukturą włókien.
Częstymi żywicielami tej choroby są rośliny cytrusowe i zielne, takie jak słodka pomarańcza, grejpfrut, mandarynka i limonka meksykańska. Objawy porażonych żywicieli obejmują międzyżyłkowe chlorotyczne plamki i plamistość liści w młodszych tkankach – w cięższych przypadkach objawy te utrzymują się w starszych tkankach. W łagodnych przypadkach kora pnia lub kończyn może wykazywać łuszczenie się i łuszczenie. W późniejszym okresie choroby dziąsło może wnikać w drewno i tworzyć nieregularny okrągły wzór. W cięższych przypadkach objawy obejmują szybką ekspansję uszkodzeń kory, zmiany nasączone gumą na gałązkach i chlorotyczne wzory na owocach.
Techniki stosowane do identyfikacji wirusa łuszczycy owoców cytrusowych obejmują test immunoenzymatyczny (ELISA), który wykorzystuje specyficzne przeciwciało do określenia antygenu, reakcję łańcuchową polimerazy w celu amplifikacji sekwencji docelowych oraz wykrywanie kwasów nukleinowych za pomocą mikromacierzy z przepływem bocznym. Inne powszechnie stosowane metody to bezpośrednie testy immunologiczne, fluorescencyjna hybrydyzacja in situ, immunofluorescencja i mikroskopia elektronowa do wykrywania patogenów wirusowych.
Wirus łuszczycy owoców cytrusowych jest często przenoszony mechanicznie przez zakażone pąki lub zanieczyszczone narzędzia. Ponadto choroba ma potencjał do proliferacji poprzez szczepienie korzeni lub zakażone nasiona. Najlepsze praktyki zarządzania, które można wdrożyć, obejmują pozyskiwanie zindeksowanych i certyfikowanych pąków wolnych od chorób, tymczasowe odzyskiwanie przez przycinanie zainfekowanej kory, usuwanie żywiciela i dezynfekcję maszyn lub sprzętu.
Izolacja
Egipski szczep wirusa łuszczycy owoców cytrusowych (CPsV-EG) wyizolowano z naturalnie zakażonego grejpfruta cytrusowego ( Citrus paradisi Macf.) w ARC. Stwierdzono, że grejpfrut użyty do izolacji CPsV-EG jest wolny od CTV , CEVd i Spiroplasma citri przez testowanie odpowiednio DTBIA, hybrydyzacji druku tkankowego i barwienia Diene'a.
Izolat CPsV-EG został przeniesiony z zakażonego cytrusa na cytrusy za pomocą strzykawki i szczepienia, a rośliny zielne zaszczepiono palcem wskazującym i strzykawką. Wskaźniki zdrewniałe i podkładki różniły się odpowiedzią na izolat CPsV-EG, która objawiała się brakiem odpowiedzi, odpowiedzią, wrażliwością i nadwrażliwością. Częściowy fragment RNA3 (gen białka płaszcza) CPsV-EG (–1140 pz i –571 pz) zamplifikowano metodą reakcji łańcuchowej polimerazy z odwrotną transkrypcją (RT-PCR) z tkanek grejpfruta przy użyciu dwóch zestawów starterów specyficznych dla CPsV (CPV3 i CPV4) i (PS66 i PS65) odpowiednio. Badany wirus został zidentyfikowany jako izolat CPsV-EG na podstawie cech biologicznych, serologicznych i molekularnych. Charakterystyka serologiczna reprezentowana jako determinanty antygenowe izolatu CPsV-EG związana z przeciwciałami monoklonalnymi swoistymi dla szczepu CPsV, w której pojawiła się reakcja precypitacji metodą DAS-ELISA i DTBIA.
CPsV-EG wykryto na podstawie indeksowania biologicznego przez inokulację przeszczepu, która dała wzór liścia dębu (OLP) w Dweet tangor i teście serologicznym za pomocą DAS-ELISA przy użyciu CPsV specyficznych dla Mab. CPsV-EG poddano reakcji ze zmiennymi odpowiedziami na 16 roślinach żywicielskich należących do 6 rodzin. Tylko 8 roślin żywicielskich było wrażliwych i wykazywało widoczne objawy zewnętrzne, które pojawiały się jako miejscowe, systemiczne i miejscowe, po których następowały infekcje systemiczne.
Histologia
Młode liście grejpfruta zarówno roślin zdrowych, jak i zakażonych CPsV-EG badano histologicznie i ultrastrukturalnie.
Ogólnie infekcja CPsV-EG atakuje górny naskórek liścia, który składa się z nie-tabelkowych komórek miąższu pokrytych cienką warstwą naskórka . Komórek zawierających krystaliczny idioblast (CI) brakuje w warstwie palisady i wystają one do naskórka. Brakuje gruczołów łojowych w porównaniu ze zdrowymi liśćmi. Wzrost wtórny występuje w żyłach środkowych i głównych żyłach bocznych w mniejszych żyłach. Zakończenie żyły składa się z pojedynczego trachoidalnego [ sprawdź pisownię ] pasma wydłużonych komórek miąższu otoczonych osłonką pęczka w porównaniu ze zdrowymi.
Ultrastruktura porażonych liści wykazała szereg zmian. Zainfekowane komórki mają dużą liczbę nieprawidłowych chloroplastów , mitochondriów i przerośniętych jąder. Komórki roślin cytrusowych zakażonych CPsV-EG mają nienormalnie wydłużone i zakrzywione mitochondria. Jądra mają kilka ciemno zabarwionych ciał, które są przesunięte w kierunku obwodu jądra wzdłuż otoczki jądrowej. Czasami jąderka wydają się nienormalnie ukształtowane. Znaleziono również ciałka inkluzyjne, które mogą zawierać cząsteczki wirusa.
Szczepy
Trzy egipskie izolaty wirusa łuszczycy owoców cytrusowych (CPsV-EG) — ARC, TB i TN — uzyskano z trzech odmian cytrusów — odpowiednio Grapefruit , Balady i Navel . Izolaty te różniły się niektórymi objawami zewnętrznymi. Izolaty CPsV-EG wykryto za pomocą indeksowania biologicznego, dając początek wzorowi liścia dębu (OLP) na Dweet tangor. Trzy izolaty różnicowano za pomocą testu immunoenzymatycznego z podwójną kanapką z podwójnym przeciwciałem (DAS-ELISA), zdrewniałych roślin wskaźnikowych, zróżnicowanych żywicieli, izozymów i aktywności peroksydazy, całkowitej zawartości RNA i rezerw transkrypcji-reakcji łańcuchowej polimerazy (RT-PCR). Ciężki izolat (ARC) dał najwyższą wartość OD (2,204) w teście ELISA, następnie łagodny izolat (TB) (1,958) i ostatni utajony izolat (TN) (1,669). Izolaty te różniły się także okresem inkubacji, nasileniem objawów oraz odpowiedzią na wrażliwość zdrewniałych roślin wskaźnikowych i żywicieli różnicujących. Izolaty CPsV-EG wykazywały różnice we frakcjach izoenzymów, wartości i intensywności RF w porównaniu z rośliną zdrową. Wyniki potwierdziła aktywność peroksydazy, gdzie poziom aktywności peroksydazy był istotnie wyższy w liściach ARC niż TB i ostatni TN. Całkowita zawartość RNA w zakażonych liściach była najwyższa w ARC, a następnie w izolacie TB, a najniższa w izolacie TN. Wreszcie, RT-PCR wykazała różnice między izolatami CPsV-EG produktów PCR przy użyciu specyficznego startera (Ps66 i Ps65), gdzie liczba podstawowa izolatu ARC genu białka płaszcza wynosiła 571 bp; Izolat TB 529 pz i izolat TN 546 pz.