Synapto-pHluorin

Synapto-pHluorin jest genetycznie zakodowanym optycznym wskaźnikiem uwalniania i recyklingu pęcherzyków. Jest używany w neuronauce do badania uwalniania przekaźnika. Składa się z wrażliwej na pH postaci białka zielonej fluorescencji (GFP) połączonej z luminalną stroną białka błonowego związanego z pęcherzykami (VAMP). Przy kwaśnym pH wewnątrz pęcherzyków przekaźnikowych synapto-pHluorin jest niefluorescencyjne ( wygaszone ). Kiedy pęcherzyki zostają uwolnione, synapto-pHluorin zostaje wystawiony na działanie neutralnej przestrzeni zewnątrzkomórkowej, a końcówka presynaptyczna staje się jasno fluorescencyjna. Po endocytozie , pęcherzyki ponownie się zakwaszają i cykl może rozpocząć się od nowa. Chemiczna alkalizacja wszystkich pęcherzyków jest często stosowana do normalizacji sygnałów synapto-pHluorin. Synapto-pHluorin czasami składa się z żółtego białka fluorescencyjnego (YFP) do monitorowania cytoplazmy, ponieważ jego pKa _jest wyższe niż GFP (7,1 w porównaniu do 6,0).

Historia

Synapto-pHluorin został wynaleziony przez Gero Miesenböcka w 1998 roku. W 2006 roku opublikowano ulepszoną wersję, wykorzystującą synaptofizynę do kierowania GFP do pęcherzyków. W 2013 roku wprowadzono dwukolorowy czujnik uwalniania (ratio-sypHy) do określania wielkości puli recyklingu w poszczególnych synapsach.

Aplikacje

Synapto-pHluorin jest używany głównie przez neurobiologów do badania uwalniania przekaźników i recyklingu w terminalach presynaptycznych . Zostało również zastosowane do badania insuliny w komórkach beta trzustki .