NeuN

Hipokamp szczura wybarwiony przeciwciałem przeciwko NeuN/Fox-3 (zielony), zasadowym białkiem mieliny (czerwony) i DNA (niebieski). Przeciwciała i zdjęcie dzięki uprzejmości EnCor Biotechnology Inc.

móżdżku dorosłego szczura na zielono. Przeciwciało NeuN/Fox-3 wiąże się z małymi komórek ziarnistych móżdżku , które tworzą wyraźną warstwę. W przeciwieństwie do przeciwciała bliskiego krewnego NeuN/Fox-3, Fox-2, pokazano na czerwono. Przeciwciało Fox-2 wybarwia neurony Purkinjego i komórki Golgiego , które nie są rozpoznawane przez przeciwciało NeuN/Fox-3. Komórki Purkinjego tworzą warstwę powyżej znacznie liczniejszych komórek ziarnistych, a sporadyczne komórki Golgiego, również pozytywne dla Fox-2, ale negatywne dla NeuN / Fox-3, można zobaczyć w warstwie komórek ziarnistych. DNA jest pokazane na niebiesko. Przeciwciała i zdjęcie dzięki uprzejmości EnCor Biotechnologia Inc.

NeuN (Fox-3, Rbfox3 lub Hexaribonucleotide Binding Protein-3) , białko, które jest homologiem produktu białkowego genu determinującego płeć w Caenorhabditis elegans , jest neuronalnym antygenem jądrowym , który jest powszechnie stosowany jako biomarker dla neuronów .

Historia

NeuN został po raz pierwszy opisany w 1992 roku przez Mullena i wsp., którzy stworzyli serię przeciwciał monoklonalnych przeciwko mysim antygenom z pierwotnym zamiarem znalezienia markerów immunologicznych specyficznych dla gatunku myszy do wykorzystania w eksperymentach transplantacyjnych. W przypadku wyizolowania hybrydoma wytwarzającej przeciwciało monoklonalne o nazwie mAb A60, które wykazywało zdolność wiązania antygenu wyrażanego tylko w jądrach neuronów i w mniejszym stopniu w cytoplazmie komórek nerwowych, i która okazała się działać na wszystkich kręgowcach. Dlatego antygen ten był znany jako NeuN od „jąder neuronowych”, chociaż przez następne 17 lat nie było wiadomo, z czym wiąże się przeciwciało A60. W 2009 roku Kim i in. zastosowali proteomiczne , aby wykazać, że NeuN odpowiada białku znanemu jako Fox-3, znanemu również jako Rbfox3, ssaczemu homologowi Fox-1, białka pierwotnie zidentyfikowanego na podstawie badań genetycznych nicieni C. elegans .

Struktura

Western blot pokazuje, że mAb A60 wiąże się z dwoma prążkami o pozornej masie cząsteczkowej ~46kDa i ~48kDa na SDS-PAGE . Te dwa prążki są generowane z pojedynczego genu Fox-3 przez alternatywne składanie . W rzeczywistości istnieją cztery produkty białkowe z genu Fox-3 w wyniku obecności lub braku dwóch sekwencji aminokwasowych kodowanych przez dwa eksony. Włączenie lub brak 47 aminokwasów z eksonu 12 powoduje powstanie prążków ~46kDa i ~48kDa widocznych na żelach SDS-PAGE, podczas gdy włączenie lub brak 14 aminokwasów w eksonie 15 daje dwie formy, które są zbyt podobne pod względem wielkości cząsteczkowej, aby można dostrzec na typowych żelach SDS-PAGE. Co ciekawe, białko kodowane przez ekson 15 dodaje C-końcową sekwencję lokalizacji jądrowej typu PY , co przypuszczalnie wyjaśnia, dlaczego białko NeuN/Fox-3 może być zarówno jądrowe, jak i, w niektórych typach komórek, także cytoplazmatyczne . Wszystkie formy ulegają ekspresji tylko w neuronach, więc przeciwciało mAb A60 i inne podobne przeciwciała przeciwko NeuN/Fox-3 stały się bardzo szeroko stosowane jako solidne markery neuronów.

Używa jako neuronowego biomarkera

Przeciwciała NeuN są szeroko stosowane do oznaczania neuronów, pomimo pewnych niedociągnięć, a wyszukiwanie Pubmed ze stycznia 2023 r. Przy użyciu słowa kluczowego „NeuN” dało 4200 trafień. Kilka typów komórek neuronalnych nie jest rozpoznawanych przez przeciwciała NeuN, takie jak komórki Purkinjego , komórki gwiaździste i Golgiego móżdżku, węchowe komórki mitralne , fotoreceptory siatkówki i neurony ruchowe gamma rdzenia kręgowego . Jednak ogromna większość neuronów jest silnie dodatnia względem NeuN, a immunoreaktywność NeuN jest szeroko stosowana do identyfikacji neuronów w hodowli tkankowej i na skrawkach oraz do pomiaru stosunku neuron/glej w obszarach mózgu. Immunoreaktywność NeuN staje się oczywista, gdy neurony dojrzewają, zwykle po obniżeniu ekspresji Doublecortin , markera obserwowanego na najwcześniejszych etapach rozwoju neuronów.

Feminizujące miejsce na homologu X

- 3 należy do rodziny ssaczych homologów białka Fox-1, pierwotnie odkrytego w nicieniach C. elegans jako białkowy produkt genu zaangażowanego w determinację płci. Fox jest w rzeczywistości akronimem „Feminizing locus on X”. Genom ssaków zawiera trzy geny homologiczne do C. elegans Fox-1, zwane Fox-1, Fox-2 i Fox-3. Wszystkie białka Foxa mają wielkość około 46 kDa i każde z nich zawiera centralny, wysoce konserwatywny ~70 aminokwasowy motyw rozpoznawania RRM lub RNA . Domeny RRM są jednymi z najpowszechniejszych w ludzkim genomie i znajdują się w wielu białkach, które wiążą cząsteczki RNA . NeuN/Fox-3 i inne białka Fox działają w regulacji mRNA i wiążą określone sekwencje RNA. Aby zapoznać się z przeglądem rodziny białek Fox, zobacz ten odnośnik. Alternatywną nazwą Fox-3 jest białko wiążące heksarybonukleotyd 3, ponieważ Fox-3, podobnie jak Fox-2 i Fox-1, wiąże heksarybonukleotyd UGCAUG, a wiązanie to bierze udział w regulacji splicingu mRNA.

Według stanu na dzień 15 czerwca 2011 r. ten artykuł pochodzi w całości lub w części z EnCor Biotechnology Inc. Właściciel praw autorskich udzielił licencji na treść w sposób, który pozwala na ponowne wykorzystanie zgodnie z CC BY-SA 3.0 i GFDL . Należy przestrzegać wszystkich odpowiednich warunków. Oryginalny tekst znajdował się pod adresem „Monoclonal Antibody to Fox3/NeuN”