Elektroforeza nieciągła
Elektroforeza nieciągła (potocznie elektroforeza dyskowa ) to rodzaj elektroforezy w żelu poliakryloamidowym . Został opracowany przez Ornsteina i Davisa. Ta metoda zapewnia wysoką rozdzielczość i dobrą definicję pasma. Jest to szeroko stosowana technika rozdzielania białek według wielkości i ładunku.
metoda
W tej metodzie żel dzieli się na dwie nieciągłe części, żel rozdzielający i żel układający się w stos, obie mają różne stężenia poliakryloamidu. Ten o niższym stężeniu jest układany na wierzchu tego o wyższym stężeniu. Nieciągłość opiera się na czterech parametrach: strukturze żelu, wartości pH buforu, sile jonowej buforu oraz rodzaju jonów w żelu i buforze elektrody. Bufor elektrody zawiera glicynę . Glicyna ma bardzo niski ładunek netto przy pH 6,8 żelu do układania w stos, więc ma niską mobilność . Białka są rozdzielane zgodnie z zasadą izotachoforezy i tworzą stosy w kolejności ruchliwości (efekt układania). Ruchliwość zależy od ładunku netto, a nie od wielkości cząsteczki. Białka poruszają się w kierunku anody powoli ze stałą prędkością, aż do osiągnięcia granicy żelu separacyjnego. Nagle wzrasta opór tarcia, ale nie ma to wpływu na glicynę, która przechodzi przez białka i staje się silnie naładowana w strefie rozdzielczej. Białka obecne w jednorodnym buforze zaczynają się rozdzielać w oparciu o zasady elektroforezy strefowej. Teraz ich mobilność zależy zarówno od rozmiaru, jak i ładunku. Wartość pH wzrasta do 9,5, a ładunek netto wzrasta.
