Elektroblotting
Elektroblotting to stosowana w biologii molekularnej / biochemii / immunogenetyce metoda przenoszenia białek lub kwasów nukleinowych na membranę za pomocą PVDF lub nitrocelulozy , po elektroforezie żelowej . Białko lub kwas nukleinowy można następnie dalej analizować przy użyciu sond, takich jak specyficzne przeciwciała , ligandy, takie jak lektyny , lub barwniki. Metodę tę można stosować ze wszystkimi żelami poliakryloamidowymi i agarozowymi. Alternatywną techniką przenoszenia białek z żelu jest blotting kapilarny.
Rozwój
Ta technika została opatentowana w 1989 roku przez Williama J. Littlehalesa pod tytułem „Technika elektroblottingu do przenoszenia próbek z elektroforezy poliakryloamidowej lub podobnego żelu na membranę.
Procedura elektroblottingu
Technika ta opiera się na prądzie i roztworze buforowym do przenoszenia białek lub kwasów nukleinowych na membranę. Po elektroforezie ustawia się standardowy zbiornik lub system półsuchego transferu blottingu. Stos jest układany w następującej kolejności od katody do anody: gąbka | trzy arkusze bibuły nasączone buforem transferowym | żel | Membrana PVDF lub nitrocelulozowa | trzy arkusze bibuły nasączone buforem transferowym | gąbka. Konieczne jest, aby membrana znajdowała się między żelem a dodatnio naładowaną anodą, ponieważ prąd i próbka będą się poruszać w tym kierunku. Po przygotowaniu stosu umieszcza się go w systemie przesyłowym i przykłada się prąd o odpowiedniej wartości przez odpowiedni okres czasu, w zależności od użytych materiałów.
Zazwyczaj żel do elektroforezy jest barwiony błękitem brylantowym Coomassie po przeniesieniu, aby upewnić się, że przeniesiona została wystarczająca ilość materiału. Ponieważ białka mogą zachować lub odzyskać część swojej struktury podczas blottingu, mogą reagować ze specyficznymi przeciwciałami , co daje początek terminowi blottingu immunologicznego . Alternatywnie, białka mogą reagować z ligandami, takimi jak lektyny , co prowadzi do określenia blottingu powinowactwa .
Zobacz też
Linki zewnętrzne
- Białko (Western) Blotting - Wprowadzenie do transferu membranowego przeciwciał
- Szczegółowy elektroblotting do procedury PVDF - Laboratorium Chemii Białka
