Znacznik NE
Znacznik NE jest syntetycznym znacznikiem peptydowym (znacznik NE) zaprojektowanym jako znacznik epitopowy do wykrywania, oznaczania ilościowego i oczyszczania rekombinowanego białka. Ta opatentowana sekwencja peptydowa składa się z osiemnastu hydrofilowych aminokwasów. Ten krótki peptyd nie przyjmuje żadnej znaczącej homologii z żadnymi istniejącymi białkami występującymi w naturze. Ten syntetyczny peptyd NE przyjmuje konformację kłębka losowego i wykazuje silną immunogenność (przewidywanie obliczeniowe). Jest to korzystne, aby zapewnić ścisłą specyficzność białkom znakowanym NE, które można łatwo wykryć, określić ilościowo i oczyścić.
Wykrycie
Znacznik NE można specyficznie wykryć przy użyciu przeciwciała monoklonalnego wykrywającego anty-NE - mysiej immunoglobuliny oczyszczonej przez powinowactwo, IgG1, która specyficznie wiąże się z białkami znakowanymi NE. Ta koniugacja peptyd-przeciwciało jest walidowana metodą Western blotting , immunoprecypitacją (IP), immunocytochemią (IHC) i oczyszczaniem na zasadzie powinowactwa białek fuzyjnych NE (tj. na kolumnie powinowactwa).
Sekwencje
- Sekwencja DNA znacznika NE jest następująca: 5' ACC AAA gAA AAC CCg CgT AgC AAC Cag gAA gAA AgC TAT gAT gAT AAC gAA AgC 3'
- Odpowiednia sekwencja aminokwasowa to: TKENPRSNQEESYDDNES (Thr-Lys-Glu-Asn-Pro-Arg-Ser-Asn-Gln-Glu-Glu-Ser-Tyr-Asp-Asp-Asn-Glu-Ser)