FLASH-EDT 2
|
|
| Nazwy | |
|---|---|
| Inne nazwy Fluoresceina Arszenik Spoiwo Spinki do Włosów; Lumio zielony
|
|
| Identyfikatory | |
|
Model 3D ( JSmol )
|
|
| CHEBI | |
| CHEMBL | |
| ChemSpider | |
|
Identyfikator klienta PubChem
|
|
| UNII | |
|
Pulpit nawigacyjny CompTox ( EPA )
|
|
|
|
|
|
| Nieruchomości | |
| C 24 H 18 Jako 2 O 5 S 4 | |
| Masa cząsteczkowa | 664,49 g·mol -1 |
| Wygląd | Solidny |
| Temperatura topnienia | 169 do 172 ° C (336 do 342 ° F; 442 do 445 K) |
|
O ile nie zaznaczono inaczej, dane podano dla materiałów w stanie normalnym (przy 25°C [77°F], 100 kPa).
|
|
FlAsH-EDT 2 jest związkiem arsenoorganicznym o wzorze cząsteczkowym C 24 H 18 As 2 O 5 S 4 . Jego budowa opiera się na fluoresceinowym z dwoma podstawnikami 1,3,2-ditiarsolanowymi. Jest używany w badaniach bioanalitycznych jako znacznik fluorescencyjny do wizualizacji białek w żywych komórkach. i bladożółtym stałym fluorescynowego FlAsH - EDT 2 jest skrótem od spoiwa szpilek . do włosów - etanoditolu jest lub różowawym fluorogenicznym ciałem Ma wzór półstrukturalny (C 2 H 4 AsS 2 ) 2 -(C 13 H 5 O 3 )-C 6 H 4 COOH, reprezentujący podstawniki ditiarsolanu związane z rdzeniem hydroksyksantonowym , przyłączonym do o -podstawionej cząsteczki kwasu benzoesowego .
FlAsH-EDT 2 jest używany do znakowania specyficznego dla miejsca, selektywnie wiążąc się z białkami zawierającymi motyw tetracysteiny ( TC) Cys-Cys-Xxx-Xxx-Cys-Cys i staje się fluorescencyjny po związaniu. Wykazuje niespecyficzne wiązanie z endogennymi białkami bogatymi w cysteinę, co oznacza, że wiąże się z miejscami innymi niż to będące przedmiotem zainteresowania (CCXXCC). Dalsza optymalizacja motywu TC ujawniła ulepszone powinowactwo wiązania FlAsH do motywu CCPGCC i wyższą wydajność kwantową , gdy motyw tetracysteiny jest oflankowany specyficznymi resztami (HRWCCPGCCKTF lub FLNCCPGCCMEP).
Przygotowanie
FlAsH-EDT 2 można przygotować w trzech etapach z fluoresceiny (patrz rysunek).
Tworzenie adduktu FlAsH-TC
Wiele badań pokazuje, że trójwartościowe związki arsenu wiążą się z parami reszt cysteiny. To wiązanie jest odpowiedzialne za toksyczność wielu związków arsenu. Wiązanie jest odwracane przez 1,2-etanoditiol, który silnie wiąże się ze związkami arsenu, jak pokazuje stabilność FlAsH-EDT 2 . Takie silne wiązanie siarka-arsen można ponownie regulować, projektując domenę peptydową, która wykazuje większe powinowactwo do arsenu, taką jak motyw tetracysteiny. Modulując odległość między dwiema parami reszt cysteiny i przestrzeń między centrami arsenu FlAsH-EDT2 , można było uzyskać współpracujące i entropicznie uprzywilejowane wiązanie ditiolowo-arsenowe.
Wiązanie FlAsH-EDT 2 podlega zatem równowadze. Tworzenie adduktu FlAsH-peptyd może być faworyzowane przy niskim stężeniu EDT (poniżej 10 μM ) i odwracane przy wysokim stężeniu EDT (powyżej 1 mM).
Nieruchomości
FlAsH staje się fluorescencyjny po związaniu motywu tetracysteiny. Jest wzbudzony przy 508 nm i emituje 528 nm, zielono-żółtą, wolną fluoresceinę. Wydajność kwantowa wynosi 0,49 dla 250 nM FlAsH związanego z modelowym peptydem zawierającym tetracysteinę w soli fizjologicznej buforowanej fosforanem przy pH 7,4.
Ogólnie FlAsH-EDT 2 ma wydajność kwantową fluorescencji 0,1-0,6 z kilkoma granicami wykrywalności μM dla rozproszonego znacznika cytozolowego i współczynnikami ekstynkcji 30 - 80 L mmol -1 cm -1 . Kompleks FlAsH-peptyd również wykazał transfer energii rezonansu fluorescencji (FRET) z białek fluorescencyjnych, takich jak wzmocnione białko cyjanowej fluorescencji (ECFP) białka zielonej fluorescencji (GFP).
Aplikacja
FlAsH-EDT 2 umożliwia mniej toksyczne i bardziej specyficzne znakowanie fluorescencyjne, które przepuszcza membranę. Modyfikacja ugrupowania fluoresceiny umożliwia również analizę wielokolorową. Udowodniono, że jest dobrą alternatywą dla białek zielonej fluorescencji (GFP) z tą zaletą, że FlAsH-EDT 2 jest znacznie mniejszy ( masa molowa < 1 kDa ) w porównaniu z GFP (~30 kDa), minimalizując w ten sposób zaburzenia aktywności badanego białka.
Używać
W przeszłości FlAsH-EDT 2 był szeroko stosowany do badania szeregu zdarzeń komórkowych in vivo i struktur subkomórkowych w komórkach zwierzęcych, białka macierzy wirusa Ebola i nieprawidłowego fałdowania białek. Dzięki obrazowaniu pod mikroskopem elektronowym FlAsH-EDT 2 służy również do badania procesów transportu białek in situ . Niedawno został użyty w rozszerzonych badaniach komórek roślinnych, takich jak Arabidopsis i tytoń.