Autonomicznie replikująca się sekwencja

Autonomicznie replikująca się sekwencja ( ARS ) zawiera początek replikacji w genomie drożdży . Zawiera cztery regiony (A, B1, B2 i B3), nazwane w kolejności ich wpływu na plazmidu . Domena A jest wysoce konserwatywna, każda mutacja znosi funkcję pochodzenia. Mutacje na B1, B2 i B3 zmniejszą się, ale nie zapobiegną funkcjonowaniu miejsca pochodzenia.

Element A jest wysoce konserwatywny i składa się z sekwencji konsensusowej:

5'- T/ATTTAYRTTTT/A -3'

(gdzie Y oznacza pirymidynę , a R oznacza purynę ). Kiedy ten element jest zmutowany, ARS traci całą aktywność.

Jak widać powyżej, ARS są znacznie bogate w AT, co ułatwia replikującym się białkom zakłócenie wiązania H w tym obszarze. Kompleks białkowy ORC ( kompleks rozpoznawania pochodzenia ) jest związany z ARS przez cały cykl komórkowy , umożliwiając replikatywnym białkom dostęp do ARS.

Analiza mutacji drożdżowych elementów ARS wykazała, że ​​każda mutacja w regionach B1, B2 i B3 powoduje zmniejszenie funkcji elementu ARS. Mutacja w regionie A powoduje całkowitą utratę funkcji.

Topnienie DNA zachodzi w domenie B2, indukowane przez przyłączenie czynnika wiążącego ARS 1 do B3. Domena A1 i B1 wiąże się z kompleksem rozpoznawania pochodzenia.

Aby zidentyfikować te sekwencje, mutanty drożdży niezdolne do syntezy histydyny transformowano plazmidami zawierającymi gen His i losowe fragmenty genomu drożdży. Jeśli fragment genomu zawierał początek replikacji, komórki były w stanie rosnąć w pożywce pozbawionej histydyny. Sekwencje te nazwano sekwencjami replikującymi się autonomicznie, ponieważ były replikowane i dziedziczone przez potomstwo bez integracji z chromosomem gospodarza .