Barwienie trichromem
Barwienie trichromowe to histologiczna metoda barwienia , która wykorzystuje dwa lub więcej barwników kwasowych w połączeniu z polikwasem . Barwienie różnicuje tkanki poprzez zabarwienie ich na kontrastowe kolory. Zwiększa kontrast cech mikroskopowych w komórkach i tkankach , co ułatwia ich obserwację pod mikroskopem .
Słowo trichrome oznacza „trzy kolory”. Pierwszym protokołem barwienia, który został opisany jako „trójchromowy”, było barwienie trichromowe Mallory'ego , które w różny sposób barwiło erytrocyty na kolor czerwony, tkankę mięśniową na kolor czerwony, a kolagen na kolor niebieski. Niektóre inne protokoły barwienia trichromowego to trichrome Massona , trichrome Lillie i trichrome Gömöri .
Zamiar
Bez barwienia trójchromowego odróżnienie jednej cechy od drugiej może być niezwykle trudne. Tkanka mięśni gładkich , na przykład, jest trudna do odróżnienia od kolagenu. Plama trichromowa może zabarwić tkankę mięśniową na czerwono, a włókna kolagenowe na zielono lub niebiesko. Biopsje wątroby mogą zawierać drobne włókna kolagenowe między komórkami wątroby, a ilość kolagenu można oszacować na podstawie metody barwienia. Metody trójchromowe są obecnie stosowane do różnicowania mięśni od kolagenu, komórek alfa przysadki od komórek beta, fibryny od kolagenu i mitochondriów w świeżo mrożonych sekcjach mięśni, między innymi. Pomaga w identyfikacji przyrostów tkanki kolagenowej (tj. zmian włóknistych), takich jak marskość wątroby i rozróżnianie guzów wywodzących się z komórek mięśniowych i fibroblastów.
Procedura
Techniki barwienia trichromem wykorzystują dwa lub więcej barwników kwasowych . Normalnie barwniki kwasowe zabarwiłyby te same podstawowe białka, ale stosując je sekwencyjnie, można manipulować wzorem barwienia. Polikwas (taki jak kwas fosfomolibdenowy lub kwas wolframowo-fosforowy ) służy do selektywnego usuwania barwnika. Uważa się, że polikwasy zachowują się jak barwniki o dużej masie cząsteczkowej : wypierają łatwo usuwalny barwnik z kolagenu. [ potrzebne źródło ]
najpierw nakłada się czerwony barwnik w rozcieńczonym kwasie octowym , aby przebarwić wszystkie składniki. Następnie aplikowany jest polikwas w celu usunięcia czerwonego barwnika z kolagenu i niektórych innych składników przez wypieranie. Nakładany jest drugi kwasowy barwnik (niebieski lub zielony) w rozcieńczonym kwasie octowym, który z kolei wypiera polikwas, w wyniku czego kolagen zabarwia się na kolor kontrastujący z pierwotnym zastosowanym barwnikiem. Jeśli erytrocyty mają być barwione, przed barwieniem czerwonym barwnikiem nakłada się żółty lub pomarańczowy barwnik o małej masie cząsteczkowej. Zwykle stosuje się go z nasyconego roztworu w 80% etanolu i często w połączeniu z kwasem pikrynowym (sam barwnik) i polikwasem. Metody wykorzystują niewielkie różnice w reakcji tkanek na barwniki, gęstość, dostępność i tak dalej. [ potrzebne źródło ]
Plamy trichromowe, w których barwniki i polikwasy są nakładane sekwencyjnie, nazywane są trichromami wieloetapowymi . W metodach „jednoetapowych” wszystkie barwniki - z polikwasem lub bez - są łączone w jednym roztworze. Jednym z najstarszych jednoetapowych podejść do barwienia trichromem jest metoda van Giesona, która barwi mięśnie i cytoplazmę na żółto, a kolagen na czerwono. Innym jest trichrome Gömöri , który bardzo naśladuje trichrome Massona. W metodach „yellowsolve” najpierw nakłada się czerwony barwnik w rozcieńczonym kwasie octowym, a następnie skrawek jest bardzo dokładnie odwadniany, aby nie pozostała wilgoć. Czerwony barwnik jest następnie zastępowany żółtym barwnikiem w rozpuszczalniku, takim jak cellosolve (2-etoksy-etanol). Imię yellowsolve to połączenie terminów yellow i cellosolve . Floksyno-tartrazyna firmy Lendrum do inkluzji komórkowych jest jednym z przykładów barwnika yellowsolve. [ potrzebne źródło ]
barwniki
Wśród barwników stosowanych do barwienia trichromem są:
- Czerwony
- Kwaśny fuksyna , ksylidynowy pąs , chromotrop 2R , Biebrich szkarłat , pąs 6R , floksyna
- Niebieski i zielony
- Jasnozielony SF żółtawy , Fast Zielony FCF , błękit metylowy , wodny błękit
- Żółty
- Kwas pikrynowy , pomarańczowy G , żółcień marsjańska , tartrazyna , żółty mielony
Zobacz też
Notatki
- Baker JR (1958) Zasady mikrotechniki biologicznej. Londyn: Methuen. (Również przedruk w miękkiej oprawie, Franklin Classics Trade Press, USA, 2018. ISBN 978-0353331044 .)
- Horobin RW (1982) Histochemia. Stuttgart: Gustav Fischer. ISBN-3437107003.
- Horobin RW (1988) Zrozumienie histochemii. Chichester: Ellis Horwood. ISBN9780470210604.
- Kiernan JA (2015) Metody histologiczne i histochemiczne, wyd. Banbury, Wielka Brytania: Scion. ISBN9781907904325.
- Prento P. (2009) Barwienie makrocząsteczek: możliwe mechanizmy i przykłady. Biotechnologia. Histochem. 84: 139-158.
- Puchtler H. Isler H. (1958) Wpływ kwasu fosfomolibdenowego na zabarwienie tkanki łącznej różnymi barwnikami. J. Histochem. Cytochem. 6: 265-270.
- Reid PE. Iagallo M., Nehr S., Jankunis M., Morrow P. (1993) Mechanizm technik tkanki łącznej. 1. Wpływ stężenia barwnika i czasu barwienia na procedury barwienia anionowego. Histochem. J. 25: 821-829.
Linki zewnętrzne
Media związane z barwieniem Trichrome w Wikimedia Commons