Etest
Etest (wcześniej znany jako test epsilometryczny ) to sposób określania wrażliwości na środki przeciwdrobnoustrojowe poprzez umieszczenie paska nasączonego środkami przeciwdrobnoustrojowymi na płytce agarowej . Szczep bakterii lub grzyba nie będzie rósł w pobliżu stężenia antybiotyku lub środka przeciwgrzybiczego , jeśli jest wrażliwy. W przypadku niektórych kombinacji drobnoustrojów i środków przeciwdrobnoustrojowych wyniki można wykorzystać do określenia minimalnego stężenia hamującego (MIC). Etest jest zastrzeżonym systemem produkowanym przez bioMérieux . Jest to test laboratoryjny stosowany w placówkach służby zdrowia, który pomaga lekarzom wskazać, jakie stężenie środka przeciwbakteryjnego można z powodzeniem zastosować w leczeniu infekcji pacjentów.
Używać
Etest jest techniką ilościową służącą do określania wrażliwości na antybiotyki i minimalnego stężenia hamującego (w µg/ml) niektórych bakterii , w tym bakterii tlenowych Gram-ujemnych i Gram-dodatnich, takich jak Enterobacteriaceae , Pseudomonas , Burkholderia , Staphylococcus i Enterococcus oraz bakterii o wysokich wymaganiach, takie jak beztlenowce, N. gonorrhoeae , S. pneumoniae , gatunki Streptococcus i Haemophilius . Można go również wykorzystać do określenia wartości MIC dla niektórych grzybów.
Procedura
Etest to wstępnie przygotowany, nieporowaty plastikowy pasek odczynnikowy z predefiniowanym gradientem antybiotyku, pokrywającym ciągły zakres stężeń. Nakłada się go na powierzchnię płytki agarowej zaszczepionej szczepem testowym, gdzie następuje uwolnienie gradientu przeciwbakteryjnego z plastikowego nośnika do agaru, tworząc stabilny i ciągły gradient pod paskiem iw jego pobliżu.
Czas potrzebny do przygotowania płytki zależy od rodzaju badanej bakterii oraz warunków panujących na płytce agarowej. Predefiniowany gradient Etest pozostaje stabilny przez co najmniej 18 do 24 godzin; to znaczy okres obejmujący krytyczne czasy wielu gatunków organizmów wybrednych i niewymagających.
Po teście wzrost bakterii staje się widoczny po inkubacji i widoczna jest symetryczna elipsa inhibicji wyśrodkowana wzdłuż paska. Wartość MIC odczytuje się ze skali w µg/ml, gdzie krawędź elipsy przecina pasek. Po wymaganym okresie inkubacji odczytuje się minimalną wartość hamowania w miejscu, w którym krawędź elipsy hamowania przecina bok paska. Tabliczki nie należy odczytywać, jeśli kultura wydaje się być mieszana lub jeśli trawnik jest zbyt lekki lub zbyt ciężki.
Punkty końcowe Etest MIC są zwykle wyraźnie określone, chociaż można zaobserwować różne wzorce wzrostu/hamowania w zależności od zastosowanego środka przeciwgrzybiczego lub antybiotyku.
Wybór podłoża agarowego
Etest można stosować z wieloma różnymi rodzajami podłoża agarowego AST, o ile podłoże to zapewnia dobry wzrost organizmów testowych i nie zakłóca działania środka przeciwdrobnoustrojowego. Jednakże, aby zmaksymalizować odtwarzalność, wybrana pożywka powinna spełniać podstawowe wymagania dla pożywki do oznaczania wrażliwości. Następujące media AST są zalecane do użytku z Etest: [ potrzebne źródło ]
- Aeroby: agar Muellera Hintona, taki jak MHE (bioMérieux)
- Bakterie beztlenowe: Agar z krwią Brucella z odpowiednimi dodatkami
Podłoża te mogą wymagać dodatkowych składników odżywczych w celu uzyskania zwiększonego wzrostu organizmów o wysokich wymaganiach żywieniowych, takich jak pneumokoki, paciorkowce, Abiotrophia , Haemophilus , gonokoki, meningokoki i Campylobacter . Ogólnie rzecz biorąc, zalecenia medialne Instytutu Standardów Klinicznych i Laboratoryjnych (CLSI) oraz Europejskiego Komitetu ds. Oznaczania Wrażliwości Drobnoustrojów (EUCAST) są uważane za odpowiednie dla Etest.
Dostępność
Dostępne są produkty Etest dla ponad 100 środków przeciwdrobnoustrojowych, w tym antybiotyków, środków przeciwgrzybiczych i przeciwprątkowych. Ponadto dostępne są specjalne produkty Etest do wykrywania specyficznych mechanizmów oporności [np. ESBL (beta-laktamaza o rozszerzonym spektrum), MBL (beta-laktamaza metalo), beta-laktamaza AmpC i VISA/h VISA].
Etest został dopuszczony przez FDA i oznaczony znakiem CE dla wielu organizmów w porównaniu z konwencjonalnymi metodami referencyjnymi rozcieńczeń w bulionie/agarze i wykazano, że ma doskonałą korelację.
Etest sprzętu
Rodzina przyrządów Etest została zaprojektowana w celu uproszczenia codziennego użytkowania Etest. Simplex C76, Nema C88 i Retro C80 są łatwe w użyciu, zmniejszają zmęczenie operatora, oszczędzają czas i poprawiają jakość wyników poprzez zwiększenie powtarzalności. Etest i powiązane instrumenty oferują jedną z najskuteczniejszych metod generowania wartości MIC na skalę w 15 podwojonych rozcieńczeniach do testowania wrażliwości szerokiego zakresu kombinacji leków i drobnoustrojów, w tym organizmów o wysokich wymaganiach.
- Simplex C76 automatyzuje umieszczanie od 1 do 6 różnych pasków Etest, aby uprościć konfigurację paneli MIC. Nałożenie do 6 pasków na duże płytki agarowe lub do 2 pasków na małe płytki trwa <12 sekund.
- Retro C80 to rota-plater, który upraszcza i standaryzuje inokulację małych i dużych płytek agarowych, czyniąc Etest® łatwiejszym do odczytania w porównaniu z ręcznym posiewem.
- Nema C88 to pisak próżniowy, który ułatwia aplikację pasków Etest®. Aplikator trzyma się jak długopis, a otwór odprowadzający zatyka się opuszką palca, aby wytworzyć ssanie. Przyssawkę umieszcza się na pasku, aby go podnieść, a następnie umieszcza na powierzchni agaru. Pasek jest uwalniany poprzez wyjęcie końcówki palca z otworu odprowadzającego.
Historia
Pasek Etest został po raz pierwszy opisany w 1988 roku i wprowadzony na rynek w 1991 roku przez firmę AB BIODISK. Firma bioMérieux nabyła firmę AB BIODISK w 2008 roku i kontynuuje produkcję i sprzedaż tej gamy produktów pod marką Etest.
W latach pięćdziesiątych Hans Ericsson (profesor mikrobiologii w Szpitalu Karolinska i Instytucie Karolinska w Sztokholmie), naukowy założyciel firmy AB BIODISK, opracował metodę standaryzacji testu dyfuzyjnego krążka oraz poprawy jego powtarzalności i wiarygodności w prognozach wrażliwości klinicznej. Wielkości stref zahamowania z wyników testu krążkowego porównano z minimalnego stężenia hamującego (MIC) w oparciu o referencyjną procedurę rozcieńczania agaru . Następnie oceniono korelację między rozmiarami stref a wartościami MIC za pomocą analizy regresji, a linie regresji wykorzystano do ekstrapolacji granic interpretacji stref, które odpowiadały wartościom granicznym MIC, które określały wyniki kategoryczne podatności, pośrednich i oporności.
Etest został po raz pierwszy zaprezentowany na konferencji Interscience na temat środków przeciwdrobnoustrojowych i chemioterapii (ICAAC) w Los Angeles w 1988 roku jako nowa koncepcja gradientu do oznaczania MIC. We wrześniu 1991 r. Etest został wprowadzony na rynek globalny jako produkt MIC po uzyskaniu zezwolenia amerykańskiej Agencji ds. Żywności i Leków (FDA).
Zobacz też