G418

G418

Nazwy
Preferowana nazwa IUPAC (2R , 3S , 4R , 5R , 6S ) -5-amino-6-{[(1R , 2S , 3S , 4R , 6S ) -4,6-diamino-3- {[(2R , 3R , 4R , 5R )-3,5-dihydroksy-5-metylo-4-(metyloamino)oksan-2-ylo]oksy}-2-hydroksycykloheksylo]oksy}-2- [ (1R ) -1-hydroksyetylo]oksano-3,4-diol
Inne nazwy Genetycyna O -2-amino-2,7-didesoksy - D -glicero-α- D -gluko-heptopiranozylo-(1→4) -O- (3-desoksy-4- C -metylo-3-(metyloamino)- β- L -arabinopiranozylo-(1→6))- D -streptamina
Identyfikatory
Numer CAS	49863-47-0   T
Model 3D ( JSmol )	Interaktywny obraz
CHEMBL	ChEMBL215226   N
ChemSpider	21106441   T
Bank Leków	DB04263   Y
Identyfikator klienta PubChem	123865
UNII	A08F5XTI6G   Y
Pulpit nawigacyjny CompTox ( EPA )	DTXSID10198129
InChI InChI=1S/C20H40N4O10/c1-6(25)14-11(27)10(26)9(23)18(32-14)33-15-7(21)4-8(22)16(12( 15)28)34-19-13(29)17(24-3)20(2,30)5-31-19/h6-19,24-30H,4-5,21-23H2,1-3H3/ t6-,7-,8+,9+,10+,11-,12-,13+,14?,15+,16-,17+,18+,19+,20-/m0/s1   T Klucz: BRZYSWJRSDMWLG-NQRKCNNJSA-N   Y InChI=1/C20H40N4O10/c1-6(25)14-11(27)10(26)9(23)18(32-14)33-15-7(21)4-8(22)16(12( 15)28)34-19-13(29)17(24-3)20(2,30)5-31-19/h6-19,24-30H,4-5,21-23H2,1-3H3/ t6-,7-,8+,9+,10+,11-,12-,13+,14?,15+,16-,17+,18+,19+,20-/m0/s1 Klucz: BRZYSWJRSDMWLG-NQRKCNNJBI
UŚMIECH O[C@H]3[C@H](O)[C@@H](N)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H](N)C[ C@@H](N)[C@H](O[C@H]1OC[C@](C)(O)[C@H](NC)[C@H]1O)[C@H ]2O)OC3[C@@H](O)C
Nieruchomości
Wzór chemiczny	C20H40N4O10 _ _ _ _ _ _ _
Masa cząsteczkowa	496,558 g · mol -1
Rozpuszczalność w wodzie	50 mg/ml
O ile nie zaznaczono inaczej, dane podano dla materiałów w stanie normalnym (przy 25°C [77°F], 100 kPa).   N ( co to jest T N ?) Referencje w infoboksie

G418 ( genetycyna ) jest antybiotykiem aminoglikozydowym o strukturze zbliżonej do gentamycyny B1 . Jest produkowany przez Micromonospora rhodorangea . G418 blokuje syntezę polipeptydu poprzez hamowanie etapu wydłużania zarówno w komórkach prokariotycznych , jak i eukariotycznych . Oporność na G418 jest nadawana przez gen neo z Tn5 kodujący 3'-fosfotransferazę aminoglikozydową, APT 3'II. G418 jest analogiem neomycyny i ma podobny mechanizm jak neomycyna . G418 jest powszechnie stosowany w badaniach laboratoryjnych do selekcji komórek modyfikowanych genetycznie. Ogólnie dla bakterii i alg stosuje się stężenia 5 μg/ml lub mniejsze, dla komórek ssaków stężenia około 400 μg/ml stosuje się do selekcji i 200 μg/ml do utrzymania. Jednak optymalne stężenie do selekcji opornych klonów w komórkach ssaków zależy od linii komórkowej , jak również od plazmidu niosący gen oporności, dlatego należy przeprowadzić miareczkowanie antybiotyku, aby znaleźć najlepsze warunki dla każdego systemu doświadczalnego. Miareczkowanie powinno odbywać się przy użyciu stężeń antybiotyków w zakresie od 100 μg/ml do 1400 μg/ml. Selekcja odpornych klonów może wymagać od 1 do nawet 3 tygodni.

Profil zanieczyszczeń G418

G418 jest wytwarzany w procesach fermentacji i izolacji, a wytwarzający G418 szczep Micromonospora rhodorangea wytwarza wiele innych gentamycyn podczas wytwarzania G418. Typowe zanieczyszczenia G418 obejmują gentamycyny A, C1, C1a, C2, C2a i X2. Jakość G418 nie opiera się tylko na sile działania, ale bardziej na selektywności określonej przez krzywą zabijania komórek wrażliwych w stosunku do komórek opornych. Dobry produkt G418 ma najniższą _wartość LD50 dla komórek wrażliwych (takich jak NIH 3T3 ) i najwyższą wartość LD50 ₍ może wynosić do 5000 μg/ml) dla komórek opornych (NIH 3T3 transfekowane genami oporności). Gentamycyny prawie nie wykazują selektywności, z wyjątkiem gentamycyny X2.

Zastosowanie w biologii komórki

G418 jest rutynowo stosowany jako środek selekcyjny w konfiguracjach hodowli komórkowych. Naukowcy mogą połączyć neoR ze swoim wektorem. Następnie, jeśli wektor zostanie pomyślnie wprowadzony do komórek, komórki mogą stać się komórkami opornymi na G418. Po potraktowaniu G418 te komórki-wektory umrą, podczas gdy komórki-wektory(+) przeżyją. Ta metoda może pomóc naukowcom w selekcji komórek wektora(+).