Endoglikozydaza H
| Identyfikatory | |||||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| endo-beta-N-acetyloglukozaminidazy mannozylo-glikoproteiny | |||||||||
| nr WE | 3.2.1.96 | ||||||||
| nr CAS | 37278-88-9 | ||||||||
| Alt. nazwy | Endo-β-N-acetyloglukozaminidaza H , N,N'-diacetylochitobiozylo beta-N-acetyloglukozaminidaza , mannozylo-glikoproteina endo-beta-N-acetyloglukozamidaza , di-N-acetylochitobiozylo beta-N-acetyloglukozoaminidaza , endo-beta-acetyloglukozaminidaza , endo -beta-(1->4)-N-acetyloglukozaminidaza , mannozyloglikoproteina 1,4-N-acetamidodeoksy-beta-D-glikohydrolaza , endoglikozydaza S , endo-N-acetylo-beta-D-glukozoaminidaza , endo-N- acetylo-beta-glukozaminidaza , endo-beta-N-acetyloglukozaminidaza D , endo-beta-N-acetyloglukozaminidaza F , endo-beta-N-acetyloglukozaminidaza H , endo-beta-N-acetyloglukozaminidaza L , glikopeptyd-D-mannozylo-4- N-(N-acetylo-D-glukozaminylo)2-asparagina 1,4-N-acetylo-beta-glukozaminohydrolaza , endoglikozydaza H | ||||||||
| Bazy danych | |||||||||
| IntEnz | Widok IntEnz | ||||||||
| BRENDA | Wpis BRENDY | ||||||||
| ExPASy | Widok NiceZyme | ||||||||
| KEGG | Wpis KEGG | ||||||||
| MetaCyc | szlak metaboliczny | ||||||||
| PRYM | profil | ||||||||
| Struktury PDB | RCSB PDB PDBe PDB suma | ||||||||
| |||||||||
Enzym endoglikozydaza H ( EC 3.2.1.96 ) jest enzymem o nazwie systematycznej glikopeptydo-D-mannozylo-N4-(N-acetylo-D-glukozaminylo)2-asparaginy 1,4-N-acetylo-beta-glukozaminohydrolazy . Jest to wysoce specyficzna endoglikozydaza , która rozszczepia połączone z asparaginą oligosacharydy bogate w mannozę , ale nie wysoko przetworzone złożone oligosacharydy z glikoprotein . Stosowany jest do celów badawczych w celu deglikozylacji glikoprotein i monitorowania wewnątrzkomórkowego transportu białek na szlaku wydzielniczym .
Struktura i działanie
Endoglikozydaza H jest izolowana ze Streptomyces plicatus lub Streptomyces griseus . Jego masa cząsteczkowa wynosi 29 000 Daltonów. Pierwszorzędową strukturę opisali Robbins i in. w 1984 roku
Endoglikozydaza H rozszczepia wiązanie w rdzeniu diacetylochitobiozy oligosacharydu między dwiema podjednostkami N-acetyloglukozaminy (GlcNAc) bezpośrednio w pobliżu reszty asparaginy, tworząc skróconą cząsteczkę cukru z jedną resztą N-acetyloglukozaminy pozostającą na asparaginie.
Deglikozyluje glikoproteiny mannozy, ale zakres i szybkość deglikozylacji zależy w dużym stopniu od natury glikoprotein. Szybkość deglikozylacji można zwiększyć przez denaturację glikoprotein (np. przez karboksymetylację, sulfitolizę lub ogrzewanie w obecności dodecylosiarczanu sodu). Dodatek 0,1 M 2-merkaptoetanolu znacznie zwiększa aktywność enzymu przeciwko glikoproteinom zawierającym między- lub wewnątrzcząsteczkowe mostki dwusiarczkowe, w przeciwieństwie do detergentów, takich jak Triton X-100, n-oktyloglukozyd lub detergenty obojnacze.
Zastosowania biochemiczne
Endoglikozydaza H (Endo H) jest powszechnie stosowana przez biologów komórkowych do monitorowania modyfikacji potranslacyjnych w aparacie Golgiego . Większość białek przeznaczonych na powierzchnię komórki ulega translacji przez rybosomy do szorstkiej retikulum endoplazmatycznego (ER) i translokacji do aparatu Golgiego. Po wejściu do ER cząsteczka zawierająca 14 podjednostek cukrowych jest łączona en bloc z asparaginą w sposób selektywny przez enzym transferazę oligosacharylu . To właśnie ta cząsteczka oligosacharydu jest modyfikowana przez szereg enzymów, gdy białko przechodzi przez różne przedziały aparatu Golgiego. Endoglikozydaza H jest w stanie rozszczepić każdą strukturę tego oligosacharydu podczas jego przetwarzania, aż enzym alfa-mannozydaza II Golgiego usunie dwie podjednostki mannozy . Ponieważ wszystkie późniejsze struktury oligosacharydów są odporne na cięcie Endo H, enzym jest szeroko stosowany do zgłaszania zakresu przetwarzania oligosacharydów, jakiemu przeszło białko będące przedmiotem zainteresowania.
Linki zewnętrzne
Zamknięte enzymy
Endoglikozydazy F i D rozszczepiają Glc-Nac
PNGaza F (peptyd-N4-(N-acetylo-beta-glukozaminylo)amidaza asparaginy)
